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Graves病甲状腺NADH |
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黄国良 林芬 张珍 高妍
【摘 要】 目的：探明NADH-细胞色素b5还原酶(b5R)在甲状腺激素合成中的作用。方法：应用NADH-高铁氰化钾等测定甲状腺b5R和H2O2酶活性，并在体外建立碘有机化系统，观察b5R活性与有机碘形成关系。结果：Graves病(GD)b5R活性明显增高，所形成的有机碘也明显增多，应用b5R抑制剂后有机碘形成又明显减少。GD时H2O2酶活性无改变。结论：b5R在甲状腺激素合成中起重要作用，抑制b5R活性就能抑制甲状腺激素合成。
【关键词】 Graves病 NADH-细胞色素b5还原酶 碘有机化
甲状腺激素的生物合成需要碘、过氧化物酶、甲状腺球蛋白及过氧化氢(H2O2)同时存在，H2O2是甲状腺激素合成不可缺少的成分，缺少H2O2甲状腺激素将无法合成。甲状腺内H2O2主要为NADH-细胞色素b5还原酶(NADH-cytochrome b5 reductase,b5R)产生［1，2］，因此b5R与甲状腺激素合成关系密切。我们应用NADH-高铁氰化钾还原酶法对Graves病(Gravesdisease,GD)甲状腺b5R活性进行测定，同时在体外建立碘有机化系统，观察b5R活性及应用b5R抑制剂对碘有机化的影响。探讨GD甲状腺激素生成增多的生化机制，为临床进一步开发治疗GD新药提供理论指导。
1 对象与方法
1.1 对象 手术治疗的GD15例，男4例，女11例，平均年龄(34.2±9.2)岁。另选15例与之年龄、性别相匹配，行手术治疗的甲状腺良性腺瘤患者，手术时取其远离腺瘤的正常甲状腺组织作对照。全部患者均经病理证实。
1.2 方法 甲状腺组织用预冷0.25mol/L蔗糖溶液(含1mmol/L EDTA，pH7.4)淋洗，去除结缔组织，按Kusakabe法［3］在4℃低温下称重，剪碎，制作匀浆。甲状腺匀浆用于以下研究：①b5R活性测定：用J2-21高速冷冻离心机(Beckman公司)和SCP85-Ⅱ超速低温离心机(Hitachi公司)经700×g、8 500×g、105 000×g离心分离微粒体，参考Board法［4］以高铁氰化钾为底物，NADH为辅酶，用752C紫外可见分光光度计测定b5R活性，以每分钟转化1μmol底物的酶量为1个酶单位；②蛋白质结合碘(PBI)测定甲状腺匀浆在含KI、Na、131I、NaCl、磷酸盐缓冲液等，pH为7.4的标准碘有机化系统，在37℃孵育2小时。加入20%三氯醋酸终止碘化反应，离心测沉淀物放射性脉冲。加0.5mM对氯汞苯甲酸或6mM葡萄糖和50μg/ml葡萄糖氧化酶系统观察对碘有机化影响。结果用pmolPBI/mg组织表示；③H2O2酶活性测定：经以上离心后，取微粒体上清液，用752C紫外可见分光光度计测定H2O2酶活性。以每毫克组织中H2O2酶每分钟分解吸光度为0.50的H2O2相对量为1个单位。蛋白质定量采用改进的Lowry(1951)法。
两均数间比较用t检验，结果以±s表示。
2 结 果
2.1 正常和GD甲状腺b5R活性 用酶总活力表示，正常甲状腺b5R 活性为(260.9±54.0)U/g组织，GDb5R活性为(408.3±91.9)U/g组织，GD时b5R活性明显高于正常(P＜0.05)。用酶比活性表示，正常和GD时b5R活性分别为(118.6±17.2)U/mg蛋白和(194.3±35.6)U/mg蛋白，GD时亦明显高于正常(P＜0.05)。
2.2 正常和GD甲状腺H2O2酶活性 正常甲状腺H2O2酶活性为(9.80±4.24)U/g组织，GD为(10.05±3.84)U/g组织，二组比较差异无显著意义(P＞0.2)。
2.3 b5R活性变化对碘有机化影响 正常和GD甲状腺在碘有机化系统形成的PBI分别为(15.6±2.2)pmol/mg组织和(27.3±3.1)pmol/mg组织，两组比较差异有显著意义(P＜0.05)。正常甲状腺加入b5R抑制剂对氯汞苯甲酸后，b5R活性从(260.9±54.0)U/g组织降至(36.2±6.8)U/g组织，降低86.9%(P＜0.05)；形成的PBI从(15.6±2.2)pmol/mg组织降至(7.7±1.3)pmol/mg[1] [2] 下一页
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