头孢地嗪对免疫性肝损伤小鼠外周血T细胞亚群的影响

　　宿主的免疫反应在病毒性肝炎的肝脏损伤中发挥着重要的作用[1-2]。肝炎患者的免疫状态与病情密切相关。在发生重型肝炎时，由于机体抵抗力低下，肠黏膜通透性增加等因素易导致细菌移位，发生感染[3-4]。因此，感染是重型肝炎患者的重要合并症，而败血症是重型肝炎患者死亡的一个重要原因[5]。

　　头孢地嗪(cefodizime, CDZM)是广谱高效的新型第3代头孢菌素。研究发现，CDZM具有明显的免疫调节功能，这是其他抗生素所不具备的[6]，临床应用前景广阔。目前CDZM对免疫性肝损伤动物模型的免疫调节作用在国内外尚未见报道。本研究采用流式细胞术检测免疫性肝损伤小鼠外周血T细胞亚群，观察CDZM对机体免疫功能的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物

　　健康昆明种小鼠，♀，4-5周龄，体重(20±2)g，购自河南省实验动物中心(动物许可证号：410115)。动物自动觅食、饮水。

　　1.2 试剂与仪器

　　①试剂：CDZM(1.0 g/支，山东鲁抗医药集团鲁亚有限公司，批号：040317);头孢曲松(ceftriaxone，CRO，2.0 g/支，海南通用三洋药业有限公司，批号：040301);胸腺肽(thymosin，Thy，50 mg/5 mL，吉林玉皇药业有限公司，批号：20040715);流式细胞检测剂(100T，北京市晶美基因谷科技有限公司，批号：SL140411);荧光素异硫氰酸标记的抗小鼠CD4(FITC-CD4)、藻红蛋白标记的抗小鼠CD3(PE-CD3)、荧光素藻红蛋白-青色素标记的抗小鼠CD8(PE-CY5-CD8)及相应荧光标记的同型阴性抗体FITC-IgG2b、PE-IgG、PE-Cy5-IgG2a均为美国eBioscience公司产品;脂多糖(lipoposaccharide，LPS，Sigma公司，批号：B-L2880-1)，使用前用无菌、无热原的生理盐水(NS)配制成50 mg/L的溶液;卡介苗(bacillus calmette guerin, BCG，约5×106个活菌/mg，上海生物制品研究所，批号200406001)，使用前将50 mg BCG经10 mL无菌、无热原的NS稀释为2.5×107个活菌/mL的BCG悬液;丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒(赖氏法，批号：20041101，上海申索试剂有限公司、上海生物制品研究所联合生产)。②仪器：JY-B型快速旋涡混匀器，姜堰市康健医疗器具厂;80-2型离心机，上海手术器具厂生产;FACScan型流式细胞仪，美国Becton Dickinson公司;721-100型分光光度计，上海第三分析仪器厂。

　　1.3 方法

　　1.3.1 免疫性肝损伤模型的建立

　　经小鼠尾静脉注射已配制的BCG悬液0.2 mL/只(约5×106个活菌/只)，连续注射12d后，尾静脉注射LPS 7.5 μg/只进行攻击，以诱导肝损伤，16 h后，随机选出6只小鼠，断头处死，采集血样，测定小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)，同时取出肝脏，供病理学检查。

　　1.3.2 动物分组及处理

　　正常对照组：健康小鼠13只，NS0.2 mL/只，首先尾静脉注射13 d后，随机选出6只小鼠，断头处死，采集血样，测定小鼠血清ALT，同时取出肝脏供病理检查。剩余7只小鼠改为腹腔注射法，连续给药7 d。BCG+LPS组：将造模成功的免疫性肝损伤小鼠随机分为6组，每组20只。NS组：NS 0.2 mL;CRO组：CRO 500 mg/kg;Thy组：Thy 10 mg/kg;CDZM小剂量组：CDZM 50 mg/kg;CDZM中剂量组：CDZM 200 mg/kg;CDZM大剂量组：CDZM 500 mg/kg。

　　各实验组均采用腹腔注射给药法，连续给药7 d。第7天给药3 h后断头采血，肝素抗凝后，进行T细胞亚群测定，并于12 h内测定完毕。

　　1.3.3 T细胞亚群测定

　　取两组试管，分为实验管和阴性对照管。每支实验管中均加入FITC-CD4、PE-CD3、PE-Cy5-CD8，其阴性对照管中均加入相应的同型对照抗体FITC-IgG2b、PE-IgG、PE-Cy5-IgG2a。每份抗凝全血分别加入实验管和阴性对照管各50 μL，混匀机混匀，避光保存25min;加入流式细胞检测剂2 mL，混匀机混匀，再次避光保存15 min后;1 500 r/min离心5 min，弃上清，加入PBS缓冲液1 mL，混匀;1 500r/min离心5 m

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