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脂多糖增强小鼠腹腔巨噬细胞14 2 kD蛋白质磷酸化

刘彦 王寅 崔肇春

摘 要 目的:探索LPS对小鼠腹腔巨噬细胞小分子蛋白质磷酸化的影响。方法:利用同位素掺入、SDS-PAGE、放射自显影和蛋白质印迹(Western blot)、结合蛋白激酶抑制剂与激活剂的使用,研究LPS对巨噬细胞处理后小分子蛋白质磷酸化及其相关蛋白激酶对此磷酸化的影响。结果:14.2 kD蛋白质磷酸化被LPS强烈地促进;MAPK的表达量未见明显变化;TPK抑制剂三羟异黄酮(genistein)明显抑制上述磷酸化;PKA激活剂佛斯可林(forskolin)和Gi蛋白抑制剂百日咳毒素对上述磷酸化无明显影响。结论:LPS能促进14.2 kD蛋白质的磷酸化,此磷酸化可能依赖酪氨酸蛋白激酶(TPK)。
关键词 脂多糖 巨噬细胞 蛋白质磷酸化
中国图书分类号 R392.11

Lipopolysaccharide enhances a 14.2 kD protein phosphorylation
of murine peritoneal macrophages

LIU Yan,WANG Yin,CUI Zhao-Chun.
Department of Biochemistry,Dalian Medical University,Dalian 116027

Abstract Objective:This study is aimed at exploring the influence of LPS on the phosphorylation of small MW proteins in mouse peritoneal macrophages.Methods:Radioisotope incorporation,SDS-PAGE,autoradiography,Western blot and protein kinase inhibitor and activator were used.Results:LPS strongly enhanced the phosphorylation of a 14.2 kD protein; MAPK expression was not significantly influenced by LPS;the TPK inhibitor genistein significantly inhibited this phosphorylation;the PKA activator forskolin and Gi protein inhibitor pertussis toxin did not show influence on the 14.2 kD protein phosphorylation.Conclusion:LPS enhanced the phosphorylation of a 14.2 kD protein and this phosphorylation might be TPK-dependent.
Key words Lipopolysaccharide Macrophage Protein phosphorylation

  来自细菌胞壁的脂多糖(LPS)是巨噬细胞(Mφ)激活表达多种功能的强激活剂,它能激活Mφ表达诱导型一氧化氮合酶mRNA(iNOS-mRNA)和肿瘤坏死因子mRNA(TNF-mRNA),并释放大量一氧化氮(NO)及TNF,后二者不仅是Mφ杀伤病原微生物及肿瘤细胞的主要效应分子[1],而且也是Mφ过度激活损伤组织细胞的主要致病分子[2]。现已发现蛋白激酶C(PKC)、酪氨酸蛋白激酶(TPK)及蛋白磷酸酶是Mφ表达iNOS-mRNA或TNF-mRNA信息传递通路中的重要组分[3,4],因此研究蛋白质磷酸化是探索它们作用的靶蛋白的直接方式之一。文献曾报道LPS对完整Mφ蛋白质磷酸化的影响[5],也表明LPS增强完整Mφ蛋白质磷酸化(如38、45、67、103 kD等)。完整细胞蛋白磷酸化能反映细胞蛋白磷酸化的动态水平,但大量[32P]Pi易遮盖电泳前沿小分子蛋白的磷酸化情况。本文重点观察Mφ溶解液中小分子蛋白质的磷酸化,发现LPS能增强14.2 kD蛋白磷酸化,该蛋白分子可能是LPS激活Mφ信息传递中的一个重要的调节分子。

1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试剂 LPS、genistein、f

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