|
肾上腺髓质素抑制溶血磷脂酸的促平滑肌细胞增殖作用 |
| |
养：取3月龄大耳白兔胸主动脉，以贴块法［3］在37℃通有95%空气的含有20%小牛血清的EMEM培养液中，在培养箱内传代培养，实验用第四代细胞，按5×105cell／孔接种于24孔培养板培养48 h,用无血清EMEM液再孵育24 h，按下列不同药物进行实验。
实验分组：(1)对照组：不加特殊试剂；(2)LPA组：加LPA 10-8mol／L；(3)Adm组：加Adm 10-7mol／L；(4)LPA+Adm组：在加入10-8mol／L LPA基础上，分别加入10-9、10-8、10-7mol／L Adm.
2.DNA合成测定［4］：按上述分组加入不同药物孵育4 h后，加入［3H］-胸腺嘧啶核苷(［3H］-thymidine,［3H］-TdR)1.85×104Bq／孔，再孵育10 h。冷PBS液终止反应，在Millipore 仪器上经微孔滤膜(0.45μm)收集并洗净细胞，滤膜干燥后加入闪烁液，在β闪烁计数仪上测定［3H］放射活性。
3.MAPK活性测定：参照本室以前报告的方法［5］，按前述分组加入不同药物后孵育10 min，用冷PBS液洗涤细胞，加入细胞溶解液并超声破碎细胞，细胞溶解液与按MAPK的单克隆抗体孵育提取免疫复合物以MBP为底物，加入［γ-32P］-ATP始动反应，用滤纸(P81phosphocelluse)测定MAPK活性。
6次实验每次进行双平行孔操作，结果以±s表示，方差分析组间q检验作统计学处理。
结果
一、肾上腺髓质素抑制溶血磷脂酸诱导的［3H］-TdR掺入：
在对照组，培养VSMC ［3H］［放射性］活度为7563±105 counts.min-1／孔，10-8mol／L LPA可使VSMC ［3H］-TdR掺入增加34%(P＜0.01)，LPA分别与10-9，10-8，10-7mol／L Adm合用时，VSMC［3H］-TdR掺入较LPA单用时分别低9%(P＞0.05)，12%和17%(P分别＜0.05和＜0.01)。单用Adm 10-7mol／L对［3H］-TdR掺入无明显影响(7020±940 counts.min-1／孔，与对照组比较，P＞0.05)。结果如图1所示。
Fig 1 Effect of Adm on LPA-induced ［3 H］-TdR incorporation in cultured rabbit VSMC(±s，n=6) **P＜0.01 vs control; #P＜0.05,＃＃P＜0.01，vs LPA；A＝Adrenomedulin
图1 肾上腺髓质素对溶血磷脂酸诱导的兔血管平滑肌细胞［3H］-TdR掺入的影响
二、肾上腺髓质素抑制溶血磷脂酸诱导的丝裂素活化蛋白激酶激活：
在对照组，MAPK活性为(2157±105) counts.min-1／孔，10-8mol／L LPA可使MAPK活性增加49%(P＜0.01)，LPA(10－8mol/L)与10－9、10－8、10－7mol／L Adm合用时，MAPK活性分别降低11%(P＞0.05)、32%和67%(P分别＜0.05和0.01)。单用Adm10-7mol／L对MAPK活性无明显影响(1997±13 counts.min-1／孔，与对照组比较P＞0.05)。结果如图2所示。
Fig 2 Effect of Adm on LPA-induced MAPK activation in cultured rabbit VSMC(±s,n=6) **P＜0.01 vs control；＃P＜0.05，##P＜0.01，vs LPA
图2 肾上腺髓质素对溶血磷脂酸诱导的兔血管平滑肌细胞MAPK活性的影响
讨论
LPA由膜磷脂经过磷脂酶D和磷脂酶A降解生成，是血清中的正常成分，主要以结合蛋白的形式存在。血液中LPA主要来源于活化的血小板，也可由成纤维细胞和VSMC受刺激后产生。LPA具有促平滑肌收缩和增殖作用，其丝裂原效应通过MAPK途径介导［6］。MAPK途径是细胞外信号引起细胞增殖、分化等核反应的共同途径或会聚点。兴奋G蛋白偶联受体的物质和激活酪氨酸激酶的物质刺激细胞分裂时，都要上一页 [1] [2] [3] 下一页
上一个医学论文： 精
下一个医学论文： 一种可同时检测抗双链和单链DNA抗体的快速斑点免疫金渗滤试验
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文