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一种可同时检测抗双链和单链DNA抗体的快速斑点免疫金渗滤试验 |
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兰小鹏 涂向东 黄俏佳 冯修高 唐玉钗 朱忠勇 周明宣① 陈学香①
摘 要 目的：建立一种可同时检测抗双链DNA(ds-DNA)和单链DNA(ss-DNA)抗体的快速斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)。方法：将ds-DNA和ss-DNA抗原结合在同一检测盒内，采用胶体金标记和快速膜斑点渗滤技术，同时检测抗ds-DNA和ss-DNA抗体。结果：DIGFA既可同步又可区别检测两种DNA抗体，且检测ds-DNA抗体的敏感性优于酶联免疫吸附法(ELISA)。结论：DIGFA简便、快速、可靠，是一种实用的DNA抗体检测方法。
关键词 抗双链DNA抗体 抗单链DNA抗体 斑点免疫金渗滤试验
中国图书分类号 R446.62
A rapid dot immunogold filtration assay for the simultaneous detection of ds-DNA and ss-DNA antibodies
LAN Xiao-Peng,TU Xiang-Dong,HUANG Qiao-Jia et al.
Medical Laboratory Centre,Fuzhou General Hospital,Fuzhou 350001
Abstract Objective:To develope a rapid dot immunogold filtration assay(DIGFA)for the simultaneous detection of antidouble stranded DNA (ds-DNA) and single-stranded DNA(ss-DNA) antibodies.Methods:ds-DNA and ss-DNA antigens being incorporated in a sam test kit, a novel DIGFA for the simultaneous detection of anti-ds-DNA and ss-DNA antibodies was established.Results:The test showed that the DIGFA could not only distinguish anti-ds-DNA from anti-ss-DNA antibodies but also simplify the procedure of the detection.The DIGFA was more sensitive and specific than enzyme-linked immunoabsorbent assay(ELISA).Conclusion:The DIGFA described was rapid,simple and repreducible and was a practical assay for the detection of anti-ds-DNA and ss-DNA antibodies.
Key words Anti-ds-DNA antibodies Anti-ss-DNA antibodies Dot immunogold filtration assay
DNA抗体可分为抗双链DNA(ds-DNA)和单链DNA(ss-DNA)两种，前者一般仅见于全身性红斑狼疮(SLE)，具有较高的特异性；后者可见于多种自身免疫性疾病，特异性较低。二者结合起来，有助于SLE和多种自身免疫病的诊断及鉴别诊断。本研究将ds-DNA和ss-DNA组合在同一个检测盒内，采用胶体金标记和快速膜斑点渗滤技术，建立了一种可同时检测抗ds-DNA和ss-DNA抗体的快速斑点免疫金渗滤试验(Dot immunogold filtration assay,DIGFA)。
1 材料与方法
1.1 主要试剂和材料 含质粒pBR322的大肠杆菌(福建医学院包幼迪教授惠赠)。MagicTM DNA纯化系统(Promega产品)。卵亲和素、光敏生物素(军事医学科学院产品)。小牛胸腺DNA(CT.DNA，华美产品)。葡萄球菌蛋白A(SPA，上海生物制品研究所产品)。牛血清白蛋白(BSA，德国Boehringer产品)。硝酸纤维素膜(NC 0.45 μm，黄岩生化材料厂产品)。抗ds-DNA和ss-DNA抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(上海二医大科技服务部)。[1] [2] 下一页
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