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简便有效分离培养大鼠主动脉内皮细胞的一种新方法 |
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作者：肖琼 房云海 徐蕴 田铧 张立平 田兴松
【摘要】 目的：探索分离、培养鼠主动脉内皮细胞的有效方法。方法：将鼠主动脉内膜翻向外，结扎两端，置于50 mL培养瓶中培养、传代，Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色。结果：培养6～8 d 时有少量细胞自主动脉迁移出并贴壁生长；12～14 d 时贴壁细胞覆盖大部分培养瓶面，约80%的细胞汇合成单层；传代细胞生长旺盛；细胞汇合后呈现典型的“鹅卵石”样内皮细胞特征，内皮细胞标志物Ⅷ因子相关抗原表达阳性；未见杂细胞。结论：此方法无损伤、不需要酶消化，能比较容易的获得高纯度大鼠原代主动脉内皮细胞，适用于细小血管内皮细胞的分离与培养。
【关键词】 主动脉·体外培养·内皮细胞·大鼠
A new method for isolation and culture of the endothelial cells of the rat aorta
【ABSTRACT】Objective:To investigate a modified method of isolating and culturing the endothelial cells from the rat aorta for endothelial bioresearch. Methods:Turned inside out, the aorta of the rat, of which the intima tunica was exposed, was ligated at both ends and cultured in a 50 mL culture bottle. Results:A small amount of cells migrated out from the aorta 6 to 8 days after cultured; the migrating cells spread over most of the culture surface of the bottle 12 to 14 days after cultured, 80% of them in a confluent monolayer. The confluent cells were identified as endothelial cells with the typical cobblestone appearance and the positive reaction for factor Ⅷ relative antigen, no other types of cells was observed. Conclusion:This is a woundless, nonenzymatic method of obtaining highly purified primary endothelial cells of the rat aorta, especially practical for isolation and culture of small vascular endothelial cells.
内皮细胞是研究心血管、炎症、肿瘤等疾病最常用的工具。目前，对脐静脉等较大血管原代内皮细胞的分离与培养一般采用酶消化法，技术已经成熟。但对于大鼠等小动物血管而言，由于管径细小，操作难度大，其内皮细胞的分离与培养一直存在产量少、易混入杂细胞等问题 ［1］。本研究经过反复实验，建立了一种有效获取高纯度、高数量大鼠原代血管内皮细胞的分离与培养方法。
1 材料与方法
1.1 实验材料 4周龄Wistar 大鼠10只，均为雌性，体质量140～160 g（购自山东大学动物实验中心），缝衣针，手术缝合线，胎牛血清（HyClone，购自美国），DMEM/F12培养基（Gibco，购自美国）。
1.2 培养方法
1.2.1 大鼠主动脉的原代培养 取Wistar 大鼠1只，无菌条件下打开腹腔和胸腔。截取主动脉约3 cm,放入含有青霉素105 U/L、链霉素100 mg/L的D-Hanks液中，用吸管将动脉管腔残留的血液冲洗干净。缝衣针去尖,牵引手术缝合线穿过主动脉管腔，缝合线的远端就近结扎动脉的一端，血管钳牵引缝合线近端，同时用镊子轻轻反向下滑动脉，使主动脉内膜翻出，折入缝扎动脉的另[1] [2] [3] 下一页
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