消疲怡神口服液对应激大鼠下丘脑 垂体 肾上腺 胸腺轴影响的实验研究

消疲怡神口服液对应激大鼠下丘脑—垂体—肾上腺—胸腺轴影响的实验研究

王琳　王天芳　康纯洁　刘晓兰　刘燕　张翠珍　郑君芳

　　内容提要　目的：探讨消疲怡神口服液抗应激的作用机理。方法：观察了消疲怡神口服液对强制冷水游泳大鼠模型血清单胺类物质、肾上腺抗坏血酸和下丘脑垂体单胺类递质含量及胸腺指数的影响。结果：消疲怡神口服液可以拮抗应激所致血清多巴胺、5-羟色胺含量升高和肾上腺抗坏血酸含量降低，使降低的下丘脑垂体去甲肾上腺素、5-羟色胺含量回升，但对胸腺指数无明显影响。结论：消疲怡神口服液的作用机制与其对机体下丘脑—垂体—肾上腺—胸腺轴的调节有关。

　　消疲怡神口服液是本室研制的用以治疗慢性疲劳的中药复方。大量临床研究表明，慢性疲劳的产生与精神刺激、不良习惯、过度劳累等多种应激因素有关(1)。本实验以强制冷水游泳模拟慢性疲劳的发病过程，并以较为公认的抗疲劳、抗应激药物人参皂甙作为阳性对照药物，从应激角度，观察了应激导致动物疲劳时，其下丘脑—垂体—肾上腺—胸腺轴的变化情况和药物对该变化的影响，初步探讨慢性疲劳的发病机制，消疲怡神口服液抗应激、抗疲劳的作用机理及其与中医肝脾的关系。

材料与方法

　　1　动物及分组　2级Wistar雄性大鼠，体重(170±10)g，由北京流行病研究所实验动物中心提供。按体重随机分为5组：模型组，人参皂甙组，小剂量消疲怡神口服液组(简称小剂量组)，大剂量消疲怡神口服液组(简称大剂量组)，正常对照组，每组动物15只。
　　2　药物与主要试剂　中药复方消疲怡神口服液，由枳壳、黄芪、人参、柴胡等组成。委托北京市永定制药厂加工，批号：960928，规格：每支10ml(1ml相当于1g生药)。人参皂甙片由中美合资吉林省亚威制药有限公司生产，批号：94032019，规格：每片0.1g，每片含人参总皂甙25mg。肾上腺素(E)，去甲肾上腺素(NE)，多巴胺(DA)，5-羟色胺(5-HT)，高香草酸(HVA)，5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)，3、4-双羟苯乙酸(DOPAC)，二羟苄胺(DHBA)，刀豆蛋白(ConA)等均为Sigma公司产品；YAC-1细胞株由中国医科大学肿瘤医院免疫研究室提供；3H -TdR购自中国原子能科学研究院；其余均为国产分析纯。
　　3　主要仪器　色谱柱：4×150mm，填料为Nava-PaK-C 185μm，中国科学院大连色谱中心填充；流动相：50mmol/L柠檬酸-乙酸钠，pH3.5，内含：1.0mmol/L B8离子对试剂，4%甲醇，1.8mmol/L二正丁胺，0.3mmol/L乙二胺四乙酸二钠，检测电压：＋0.75V，流速：1ml/min。Water 510高效液相色谱系统(美国Waters)；Water 464电化学检测器(美国Waters)；低温高速离心机(德国Heraeus)；超声粉碎器(英国MSE)；721分光光度计(上海第三分析仪器厂)；CO2培养箱(美国SMT)；液体闪烁计数仪(美国PTC)。
　　4　实验方法
　　4.1　造模及给药方法　Wistar大鼠购进后，置于室温(20±2)℃清洁级动物室中，每笼5只，自由进食饮水，适应1～2天后，开始造模。每日分别在不同时间令其在冷水(10±1)℃中游泳，每次6～9.5min。正常对照组，不造模。模型组、正常对照组，予蒸馏水灌胃，每天2ml；人参皂甙组，造模同时予以人参皂甙灌胃，每天70mg/kg；小剂量组和大剂量组，以消疲怡神口服液灌胃，剂量分别为每天3.5g/kg和7g/kg，共9天。以上剂量均参考临床剂量及有关文献计算(2)。
　　4.2　观察项目及检测方法
　　4.2.1　血清及下丘脑单胺类含量测定　用高效液相加电化学检测法检测(3)。颈动脉取血，3000r/min离心15min。取0.25ml血清，加0.06mol/L DHBA25μl及0.1mol/L高氯酸225μl，混匀后，11000r/min离心10min，取上清备测。另取大鼠下丘脑和垂体，置于加有0.06mol/L DHBA20μl及0.1mol/L 高氯酸380μl的Eppendorf管中，匀浆，11000r/min离心10min，取上清备测。通过高效液相色谱系统(HPLC)加电化学检测器(ECD)检测。
　　4.2.2　肾上腺抗坏血酸含量测定　采用2，4-二硝基苯肼比色法(3)。大鼠断头处死后，迅速剖取双侧肾上腺，去除周围附着组织，称重后加5%三氯醋酸3.5ml，匀浆，离心(低温，12000r/min，10min)，取上

[1] [2] [3] [4] 下一页