BG)，以BG≥13.3 mmol/L且持续1 周以上诊为DM。C-肽测定试剂盒购自天津DPC公司，RIA法测定。GAD-Ab测定试剂盒购自美 国Bi omerica公司，取血清100 μl，用ELISA法测定，结果以＜1.00 ng/ml为阴性；1.00～1.05 ng/ml之间 为可疑阳性；＞1.05 ng/ml则为阳性。 3.脾组织T细胞亚群测定：将脾脏制成单核细胞悬液，每管加抗-小鼠CD4或CD8单抗1 μl，4℃孵育45 min后；取1×106个细胞上流式细胞仪，由中科院细胞所协助进行T细胞 亚群计数，结果以百分比表示。
4.胰岛病理学观察：胰腺经石蜡包埋后切片，常规苏木素-伊红(HE)染色。由 三位病理专业人员盲法读片，分别计数5只小鼠的胰小岛数目，并采用国外标准进行胰岛炎 评分及分级〔4-8〕。胰岛炎分数：每只鼠胰切片在镜下随机计数5～10个胰岛分值 ，无胰岛炎，为0；50%有炎症，为0.50；100%胰岛有炎症，为1。分级标准：仅有胰岛周围 淋巴细胞浸润为一级(即胰周围炎)；浸润至胰岛内，但浸润程度＜50%者，为二级；浸润程 度＞50%者，为三级。
5.胰岛浸润淋巴细胞的免疫组织化学：(1)制作冰冻切片；(2)丙酮液固定10 min，PBS(50 m mol/L，pH 7.2)洗涤3次；(3)加生物素化CD4(1:120稀释)或CD8(1:200稀释)单抗50 μl ，37℃温育60 min；(4)浸于0.1%过氧化氢液，室温放置20 min；(5)加ABC(1:100稀释)50 μl，37℃温育30 min；(6)加0.5 mg/ml DAB 50 μl，显色5～8
min；(7)苏木素复染，封 片。同时做连续切片的HE对照染色。 6.胰腺超微结构观察：由上海医科大学电镜室协助完成。
7.统计学处理：各指标检测结果均以±s表示，用t检验或样本率的u检验法对结果进行显著性分析。
结 果
一、预先用GAD免疫对NOD小鼠胰岛炎和糖尿病的影响
1.糖尿病发病率：在20周的观察期内，GAD组仅有2例小鼠发生糖尿病，总发病率6.25%，比 相应的FIA 对照组发 病率(73.68%)显著降低(P＜0.01)(图 1)。
2.胰岛炎：胰腺组织学检查结果显示，雌性NOD小鼠4周龄时胰岛即开始有淋巴细胞浸润；20 周时，FIA对照组胰岛数目明显减少〔(3.1±1.8)个/只小鼠〕，残 存胰岛的炎症分数为 0.69±0.05，且(87.4±15.4)%为二、三级胰岛炎，血清C- 肽水平很低〔(1.19±1.22)ng/ml〕；而GAD免疫组胰岛数目〔(9.0±2.5)个/只小鼠〕明 显多于对照组(P＜0.05)，胰 岛炎分数降 至0.08±0.01(P＜0.05)，且炎症胰岛中(95.7±3.6)%为胰周围炎，仅(4. 17±2.73)%为二级；无 一例达到 三级者；血清C-肽〔(2.41±0.93)ng/ml〕 也明显高于前者 (P＜0.05)。
图1 GAD组和FIA组小鼠糖尿病 累积发病率变化
Fig 1 Cumulative incid ence of diabetes in female NOD mice tolerized with GAD in FIA and FIA alone
二、胰岛β细胞超微结构的变化
透射电镜下将胰组织放大5 000～10 000倍后观察胰岛周 围及内部的超微结构，结果显示：对照组 患病鼠未找到胰小岛，即使未发病小鼠，也难以找到胰岛，且残存胰岛的β细胞，内部有胞 核核膜扩张，胞浆中有大量内浆网扩张及其内部核糖体脱颗粒，分泌颗粒的数量少、分布紊 乱、且有空泡样变等异常变化；边缘有淋巴细胞存在，且其膜足突已伸入β细胞膜，使β细 胞胞膜受损；胰岛内外分泌交界处也有大量淋巴细胞存在。GAD预免疫组β细胞的核膜无 扩张；胞浆中内浆网无扩张及脱颗粒；分泌颗粒多，无异常空泡样变；β细胞边缘胞膜结构 完整，无淋巴细胞存在；胰岛内外分泌交界处的界膜完整，内外分泌
细胞间也无淋巴细胞出 现。 三、GAD腹腔注入对血清GAD-Ab的影响
测定两组小鼠血清GAD-Ab的结果显示，GAD组与FIA组的GAD-Ab水平分别为〔(0.55±0.65 )和(0.85±1.01)ng/ml〕、阳 性率 ( 14.28% vs 18.75%)两组之间差异无显著性(P
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