幽门螺杆菌cagA基因3 端多态性分析及其临床意义

【摘要】  目的 探讨幽门螺杆菌（H.pylori）cagA基因3’端多态性及其与临床疾病的相关性。方法 收集NCBI网络数据库H.pylori cagA基因全序列95条，cagA基因3’端可变区碱基、氨基酸序列387条，用Vector NTI advance 10软件对已知疾病背景的256条网络数据库cagA氨基酸序列进行多序列比较，分析cagA基因3’端序列特征及其与临床疾病的相关性。结果 （1）91条cagA基因全长氨基酸序列之间相同氨基酸百分比为27%，相似性较低；其3’端序列之间差异明显，存在大量氨基酸的插入、缺失、替换外和重复，而5’端序列相对保守。（2）cagA基因3’端氨基酸序列含有六种重复序列，分别命名为C1，C2，C3，C4，C5，C6；其中C3，C4，C6可分为两种类型，东亚型（Cn东）和西方型（Cn西）。大部分（81.86%）cagA基因3’端氨基酸序列基本结构为C1-C2-C1-C3东/C3西-C4东/C西-C5-C1-C6东/C6西。少数菌株cagA基因3’端氨基酸序列长度较长，具有不同的重复序列数目及组合方式，根据其重复序列数目及组合方式不同，可将这少数菌株cagA基因3’端氨基酸序列分为10型，其中1、7、9、10型仅存在于西方来源菌株，2、3、5、8型仅存在于东方来源菌株，4、6型为东西方菌株共有类型。（3）>4个EPIYA模体的菌株检出率在萎缩性胃炎组（11.90%）与消化性溃疡（PU）组（1.27%）比较差异有统计学意义（P<0.05），且含有4个以上EPIYA模体的菌株87.5%是在萎缩性胃炎及胃癌（GU）中检出。含多个EPIYA-C/D位点的菌株在胃癌患者中的检出率（16.67%）显著高于消化性溃疡（5.06%）患者（P<0.05）。C4数目=3时，GC组（14.81%）与PU组（2.53%）比较差异有统计学意义（P<0.05），其余重复序列数目在不同胃十二指肠疾病中无统计学意义（P>0.05）。第6型菌株在胃癌患者中的检出率（14.81%）显著高于消化性溃疡（2.53%）患者（P<0.05）。结论 （1）H.pylori菌株cagA基因3’可变区多态性明显，其差异主要由重复序列的种类、数目和组合方式造成。（2）感染>4个EPIYA模体的CagA+H.pylori可能与萎缩性胃炎及胃癌有关。（3）含多个EPIYA-C/D位点的CagA+H.pylori及第6型CagA+H.pylori可能与胃癌有关

【关键词】  幽门螺杆菌;CagA;序列分析;多态性;疾病类型［中图分类号］ R349.6

    自1984年Marshall和Warren［1］首次报道H.pylori以来，幽门螺杆菌感染已被确认为在人类胃、十二指肠疾病的发生发展中起重要作用。目前世界范围内成人H.pylori感染率达50%～80%，但H.pylori感染人群症状多种多样；目前已普遍认识到，不同菌型H.pylori的致病性存在显著差异，不同菌型之间毒力因子不同可能是致病力差异的根本原因之一。其中细胞毒素相关蛋白A（cytotoxin associated protein A，CagA）是目前已知的H.pylori最重要毒力因子之一。研究显示CagA不仅是H.pylori cag毒力岛（cag pathologinicity island，cag-PAI）的标志，而且通过由CagAPAI编码蛋白构成的细菌Ⅳ型分泌系统进入胃上皮细胞［2］，CagA由SRC激酶家族（SFK）激酶激活发生酪氨酸磷酸化，磷酸化的CagA与含Src 同源序列SH2的酪氨酸磷酸酶SHP-2（Src homology 2 domain-containing tyrosine phosphatase）形成络合物，导致宿主细胞肌动蛋白细胞骨架重排，细胞形态呈蜂鸟样改变，并激活宿主细胞的信号系统，从而促进细胞增殖、细胞周期加速［3～6］。目前认为H.pylori感染者临床表现的差异除与宿主基因易感性、环境因素有关外，其主要原因在于cagA 核苷酸序列及CagA 抗原性具有多态性，CagA磷酸化及其与SHP-2结合活性有差异，导致不同CagA 的致病性存在差异。cagA基因片段5’端相对保守，3’端相对多变，且CagA磷酸化及其与SHP-2结合位点均位于3’端。故本研究的目的是充分利用网络数据库检索到的全部H.pylori cagA基因3’端可变区碱基、氨基酸序列，试图分析其cagA基因3’端多态性及与

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