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幽门螺杆菌实验室检测与应用价值 |
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作者：胥维勇，杨红，杨群，范小莉，何娟
1983年由澳大利亚医生R·Warren和B·Marshall从胃黏膜组织中成功分离培养出幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)以来,Hp与慢性活动性胃炎和消化性溃疡以及在发病过程中的作用已得到证实。但Hp感染缺乏临床表现特征，Hp感染诊断主要依靠实验室检测。Hp检测技术日益完善和准确，方法从细菌形态学发展进入到Hp全基因序列测定分析阶段。Hp感染检测方法可分为：取胃黏膜标本检测Hp，包括细菌培养、快速尿素酶试验、组织涂片和切片染色；呼气试验和尿氨排出试验检测Hp；血清免疫学方法检测Hp。根据检测是否需做胃镜检查分为：直接检测法，必须在胃镜下取材，包括细菌培养、涂片染色、快速尿素酶试验、活检标本切片染色和多聚酶链反应等；间接检测法，不需要胃镜下取材，包括13 C、14 C呼气试验、15 N尿氨排出试验和血清免疫学检测等。Hp感染实验室检测的常用方法有：
【关键词】 幽门螺杆菌；方法学；应用价值
1 微生物学方法
1.1 细菌培养法 从胃黏膜活检标本中分离培养出Hp，再用形态学和生物化学方法鉴定，是诊断Hp感染最可靠的方法。Hp是微需氧菌，不能在大气下和绝对厌氧条件下生长，它需要的气体条件是N2 85%、CO2 10%、O2 5%，还需要有一定的湿度和较好的营养成分。Hp生长缓慢，形成的菌落细小，必须添加抑制杂菌生长的抗生素，才能提高Hp的检出率。尽管Hp感染诊断的金标准是分离培养，但它需要一些特殊设备和试验条件，国内尚未广泛开展，至今只有少数实验室把它用于科研，而不作为常规检测而用于临床。
1.2 涂片检测法 在胃镜检查时用细胞刷在胃黏膜表面刷取黏液成分或取活检标本直接涂片，经革兰(Grams)染色，在光学显微镜下观察，Hp呈Grams阴性，弯曲状、弧状、S形和C形，形态特征较明显。涂片检测Hp是一种简单实用的方法,涂片标本未经任何处理不受外界因素影响，菌体保持完整，形态与生活时相仿。为简便染色过程,Grams染色亦可简化为石碳酸复红单染法［1］，染色效果不比Grams染色逊色。还可采用相差显微镜直接观察涂片检测Hp和用吖啶橙染色，荧光显微镜观察检测Hp。
2 快速尿素酶试验
Hp产生尿素酶的能力强，尿素酶分解胃液中尿素生成NH3和CO2，快速尿素酶试验用于胃镜检查中诊断有无Hp感染。试验试剂包括尿素、pH指示剂(酚红)、缓冲液和防腐剂。在酸性条件下，当pH值≤6.8时，酚红指示剂呈黄褐色，如果活检标本中有Hp存在，尿素酶分解尿素产生NH3使试剂pH值发生变化而升至≥8.4，这时酚红指示剂由黄褐色变为红或紫红色。目前常用的尿素酶试剂在与胃镜活检标本接触后几分钟后便可显色，快速尿素酶试验属于间接试验，标本大小、细菌多少、反应时间、温度和湿度均可影响尿素酶试验结果。尿素酶试验具有快速、简便的优点，特别适合基层医院推广使用。
3 同位素示踪剂方法
这类方法主要是采用让患者口服同位素标记的尿素，利用Hp产生尿素酶能分解尿素的原理，以观察胃中Hp分解尿素的能力，以此判断患者是否感染了Hp及感染的程度，这类试验现有两类三种。Hp具有较强的内源性尿素酶，能分解胃内及核素标记的尿素，产生CO2和NH3,CO2被吸收后经肺呼出，分析呼气中的13 CO2或14 CO2即可诊断Hp的存在。根据呼气试验类似的原理，15 N尿氨排出试验是一种尿素在胃内分解后，15 N经吸收通过肾脏由尿排出的试验，让受试者口服稳定性同位素15 N标记的尿素，然后测定尿液中排出的15 NH3来判断胃内Hp的感染情况。这类试验方法属于间接检测，通过多次采集样本后在仪器上进行测定分析。
3.1 呼气试验 呼气试验的原理是基于Hp产生大量的尿素酶，给感染Hp的患者口服同位素标记尿素溶液，则尿素被分解后产生同位素标记CO2由肺呼出。可收集呼气样本，用气体同位素质谱仪或液体闪烁扫描仪检测同位素标记CO2的量来检测Hp。根据标记物的不同，分为13 C和14 C呼气试验。
3.1.1 13 C标记的尿素 用稳定性同位素13 C标记的尿素，让患者口服后，尿素在胃中与Hp产生的尿素酶接触后分解成13 CO2，测定其在总呼出量中所占的浓度，以判断胃中是否感染了Hp和感染程度。这种方法的最大优点是：体内测定胃内感染Hp的总体情况，避免了活检标本Hp分布不均造成的假阴性的[1] [2] [3] 下一页
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