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幽门螺杆菌实验室检测与应用价值 |
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结果；13 C是一种稳定性同位素，对机体无损伤；它除了定性以外，还可做定量测定。它的最大缺点是需用高精度气体比值同位素质谱仪来测定，这种设备是一般医院不具备的贵重仪器。
3.1.2 14 C标记的尿素 用14 C标记的尿素让患者口服，用闪烁扫描仪测定患者呼出的14 CO2，这种仪器在有核医学科的医院一般都有，测定方法比较方便。尽管它的优点类似于13 CO2呼气试验，但是14C是一种放射性同位素，因此这项试验对孕妇和小孩不宜使用。
3.2 尿氨排出试验 15 N尿氨排出试验是根据类似呼气试验原理创立的，其方法是用15 N标记尿素让患者口服，然后收集2 h尿液检出其15 N尿氨的排出率，以判断胃内Hp感染程度。这一试验具有13 CO2呼气试验同样的优点，不需作胃镜，无放射性损伤，采集样本比呼气试验方便，测定准确性较高，缺点与13 C呼气试验相同，检测需用气体同位素质谱仪。由于15 N尿氨排出试验是一种尿素在胃内分解后，15 N经吸收通过肾脏由尿排出的试验，因此有严重肝肾功能损害者不宜使用。
4 血清学方法
通过血清中Hp抗体测定Hp感染的方法比较多，有酶联免疫吸附试验(ELISA)、乳胶凝集试验、免疫印迹试验和细菌凝集试验等，尤其以ELISA试验应用最广泛。Hp感染后会激发机体产生特异性体液免疫，血清中出现IgG、IgA、IgM抗体，常采用ELISA试验检测Hp IgG抗体。ELISA试验是目前常用的方法，同时测定两种免疫球蛋白能提高这一方法的敏感性。在进行ELISA试验时，最重要的是抗原选择，该试验的敏感性虽高，但缺乏特异性，从而影响对试验结果的判断。要提高ELISA试验的特异性和敏感性，则需要对抗原进一步纯化，抗原则可获得较高的特异性和敏感性。血清学方法简便，成本较低，患者对采血进行检测的方法比做胃镜检查更乐意接受。由于抗Hp抗体可长时间维持在阳性水平，至少需要6个月～12个月才能降到足以预测治疗成功的程度，血清学方法便失去了原有的吸引力，但在流行病学调查中仍有它的应用空间。
5 多聚酶链反应
多聚酶链反应(Polymerase chain reaction，PCR)实际上是一种核酸片段体外扩增试验。做试验的先决条件是首先必须清楚某一基因的核苷酸序列，然后人工合成其中两个特异性片段作为引物，在PCR仪上经过30个～50个循环扩增其核酸片段，使其成倍增长，然后取其片段作琼脂糖凝胶电泳，电泳后取出凝胶在紫外线灯下观察结果，即可判断所得产物是否为基因产物。目前亦可用这一反应来检测标本中有无Hp的存在，甚至还可进一步用核苷酸序列分析或特异性探针加以鉴定。可是PCR高敏感性也有它致命的弱点，使用试剂浓度、操作温度、过度扩增、极少DNA污染等都可导致假阳性。严格控制，合理选择DNA扩增循环次数，防止污染，设置对照等都是不可忽视的因素。采用PCR技术在Hp诊断和评价治疗后根治效果有意义，但对实验室和试验条件要求高，如果在非标准条件下进行检测，有可能会出现悬殊的结果，特别是假阳性的大量出现。目前PCR技术不适合用于临床检测Hp感染。
6 组织切片染色法
6.1 胃黏膜活检标本 病理组织切片染色检测Hp是最常用的方法，活检标本经石蜡包埋切片染色后，Hp在显微镜下形态特征是菌体2 μm～4 μm长，0.5 μm宽，Hp为弧形成螺旋状弯曲样细菌，定植于胃黏膜上皮细胞表面、胃小凹和胃内腺腔中，常规HE染色凭Hp形态及定植部位可以识别。当Hp量少或有上皮细胞脱落时而难以辨认时，就需要采用其他组织化学染色方法来鉴别诊断，迄今没有一种染色方法对Hp的显示是特异的。显示Hp的染色方法有：改良Warthin-Starry银染色、改良Giemsa、碱性品红、石碳酸复红、亚甲蓝、中性红、甲苯胺蓝、甲基紫、甲苯酚紫和吖啶橙染色等10余种染色法。改良Warthin-Starry银染色是经典的Hp染色方法［2］，Hp在黄色背景下呈现出黑色螺旋状形态，该染色方法技术要求高，操作繁琐，每次染色需加温、恒温及配显影液，热水冲洗等，若操作不当容易造成在切片上留下银颗粒沉淀与Hp横截面形态相混淆的现象；改良Giemsa染色是一步双色快速染色法，操作更为简便，染色效果好，现已广泛应用于常规检测和科研中［3］，在显微镜下Hp染成淡蓝色，菌体形态清楚，切片背景清晰，不但可观察到Hp数量、侵入深度和分布情况，还能观察到胃黏膜病理改变情况等；碱性品红、石碳酸复红、亚甲蓝上一页 [1] [2] [3] 下一页
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