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类风湿关节炎滑膜巨噬细胞来源的研究 |
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岁，平均年龄(51±14)岁，病程8个月～20年，平均病程(13±8)年，外伤性关节炎滑膜6例；正常滑膜7例，取自半月板损伤患者。
1.2 方法：滑膜组织离体后立即用10%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，连续切片，切片厚度为4 μm，分别作HE染色和CD68、PCNA免疫组化染色(LSAB法［2］)。CD68单抗(DAKO，MO814)、PCNA PC10单抗(DAKO，MO879)工作液浓度分别为1∶200、1∶100。CD68检测时需进行微波修复抗原。DAB显色，苏木素复染核。以PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定：CD68阳性细胞为胞浆棕黄或棕褐色，PCNA阳性细胞为核着色，呈弥漫或颗粒状的棕黄或棕褐色。结果观察阳性细胞的分布并计数。衬里层CD68阳性细胞百分数为衬里层CD68阳性细胞数占衬里层总细胞数的百分数，并进一步分为：1为＜10%，2为10%～25%，3为25%～50%，4为50%～75%，5为≥75%。衬里下层CD68阳性细胞数为5个高倍视野衬里下层CD68阳性细胞数的平均数。PCNA阳性细胞计数采用目镜网格测微尺(10×10方格表)进行半定量计数。每张切片分别随机选择5个增生明显的滑膜衬里层和衬里下层视野，计算每个视野5×10方格中的阳性细胞数，取其平均值分别为衬里层和衬里下层的阳性细胞数，并将结果进一步分为：0为无阳性细胞或整个切片偶见2～3个阳性细胞；1为阳性细胞数5个以下；2为阳性细胞数5～10个；3为阳性细胞数11～15个；4为阳性细胞数15个以上。
1.4 统计学方法：两组计量资料的均数比较采用t检验，两组等级资料的比较采用非参数检验(Mann-whitney U检验)，P＜0.05为差异显著。
2 结果
2.1 CD68染色结果：见图1、2。正常滑膜衬里层细胞几乎全部CD68阳性而衬里下层CD68阳性细胞极少。RA和非RA滑膜衬里层滑膜细胞大部分CD68阳性，尤其是RA滑膜表层的滑膜细胞几乎全部CD68阳性，衬里下层也见较多的CD68阳性细胞。RA与非RA滑膜CD68阳性细胞数的比较见表1。
表1 两组滑膜CD68阳性细胞数的比较
组别 例数 衬里层CD68阳性
细胞百分数* 衬里下层CD68
阳性细胞数**
RA滑膜 26 16.3 43±20
非RA滑膜 20 14.5 22±13
注：*数值为平均秩，P＞0.05；**数值为平均秩，P＜0.05
图1 正常滑膜组织CD68免疫组织化学染色LSAB×100
图2 RA滑膜组织CD68免疫组织化学染色LSAB×100
2.2 PCNA染色结果：正常滑膜组织未见PCNA阳性细胞或全片仅见2～3个阳性细胞。RA和非RA滑膜衬里层和衬里下层均可见PCNA阳性细胞，衬里下层PCNA阳性细胞主要是成纤维细胞、血管内皮细胞及浸润的炎症细胞，但其中淋巴细胞、浆细胞均为阴性。两组滑膜衬里层和衬里下层PCNA阳性细胞数的比较见表2。
表2 两组滑膜PCNA阳性细胞数的比较
组别 例数 衬里层PCNA
阳性细胞数* 衬里下层PCNA
阳性细胞数*
RA滑膜 26 20.5 20.8
非RA滑膜 20 13.7 14.2
注：*表内值为平均秩，P＜0.05
2.3 同时对照CD68和PCNA染色结果，发现RA滑膜衬里层和衬里下层部分CD68阳性细胞PCNA也阳性。
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