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上海地区汉族正常人及类风湿关节炎病人HLA |
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朱乃硕 王福庆 陈诗书 王慧
中国图书分类号 R392.13
人类MHC-II类DP抗原是由α链和β链组成的异二聚体糖蛋白，其中β 链具有 高度多态性。α链和β链分别由第6号染色体上的DPA1和DPB1基因编码，DPB1基因第2个外 显子核苷酸序列变异最大［1］，并可以反映各等位基因的多态性差异。近年研究注 意到，某些DP等位基因(如DPB1*0401)与白种人类风湿关节炎(RA)等自身免疫性疾病相关［2］。王福庆等曾对汉族正常人DP基因作了调查［3］，但对汉族类风湿关节炎 病人DP基因的研究尚少见报道。本文拟对RA病人DPB1基因进行比较研究，探索中国汉族正常 人及类风湿关节炎病人HLA-DPB1基因多态性，了解RA发病的分子机制。
1 材料与方法
1.1 研究对象 正常人150例，血液取自上海地区健康汉族人，RA病人48例 ，血液由上海市仁济医院提供。白细胞DNA参照文献［4］进行。
1.2 PCR及RFLP分析 DPB1第2外显子PCR引物参照第12届国际HLA讨论会 推荐序列合成：DPBAMP-A 5’GAG AGT GGC GCC TCC GCT CAT 3’，DPBAMP-B 5’GCC GGC CCA AAG CCC TCA CTC 3’［3］，扩增片段长度327 bp，PCR方法参照文献 ［4］进行。6种限制性内切酶：RsaI，DdeI,Fok I,Ban II,Bst UI,Eco NI为Boilabs产品， 取PCR产物10～12 μl,加限制性内切酶8～10 U，按各酶最适温度要求保温2～3 h，然 后以15% PAGE或4%琼脂糖(NuSieve GTG,FMC产品)电泳，溴乙锭染色，于紫外透射仪上观察 结果。
2 结果
2.1 DPB1第2外显子PCR及RFLP定型结果 对所有正常人和RA病人均显示 良好的327 bp 扩增条带。DPB1各等位基因限制性内切酶水解片段格局见文献［3］。在本组中国人群中共检 出18种DPB1等位基因，正常人中检出12种，有4种等位基因频率较高：DPB1*0501(38.7%)、* 0201(17.3%)、*0202(11.7%)、*0401(10.7%)，其频率总和达78.3%。而在RA病人中 检出了16 种，其中4种频率较高的等位基因是DPB1*0501(25.0%)、*0201(19.8%)、*0402(14.6%) 及*2201(5.2%)，其频率总和达64.6%，见表1。
表1 正常人及RA病人DPB1各等位基因频率比较
Tab.1 Comparison of DPB1 allele frequency in
RA patients and healthy controls
DPB1 Control(n=150) RA patients(n=48)
0101/2601(a) 0.0 1.0
0201/3201(a) 17.3 19.8
0202 4.0 4.2
0301/2901(a) 4.0 1.0
0401 10.7 6.3
0402/2301(a) 11.7 14.6
0501 38.7 25.01)
0901 0.0 1.0
1001 0.7 1.0
1301 3.7 2.1
1401 1.7 4.2
1601 0.0 4.21)
1701 6.3 2.1
1901 0.7 0.0
2101 0.7 0.0
2201 0.0 5.21)
2401 0.0 2.1
2701 0.0 1.0
X 5.2
Note:1)P＜0.05；X.the alleles'RFLP patterns are different with al leles that have published;a.the fragments digested by restriction endonucleases are similar each other
2.2 正常人及RA病人DPB1各等位基因频率比较分析 从结果看，RA 病[1] [2] 下一页
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