采用Trizol一步法提取总RNA，CTGF引物由上海中生生物工程公司合成，其序列为5′-GAA AGA CAG GTA CTA GCT GA-3′，5′-CGT ACC ATA TGT TCT GAC AG-3′；扩增产物长度为521 bp。GAPDH引物序列为5′-GTG CTG AGT ATG TCG TGG A-3′，5′-CAC AGT CTT CTG AGT GGC A-3′，扩增产物长度为298bp。选用美国Thermo Hybaid PCR仪，反应条为：①cDNA的合成和预变性：42℃,45 min；94℃,5 min；②PCR扩增：94℃，45 s；55.8℃，45 s；72℃，45 s；共35个循环；③循环完毕后72℃延伸7 min。PCR产物的定量分析以GAPDH校正做相对量分析，用图像析处理系统(UVP公司)进行灰度扫描，以CTGF与GAPDH之间光密度的比值表示CTGF mRNA的相对含量。 1.8 统计学处理
数据以均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 11.5统计软件进行数据分析，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 各组大鼠24 h尿蛋白定量比较
见表1。表1 各组大鼠24 h尿蛋白定量比较（略）
由表1可见，模型组较正常组显著升高(P<0.01)，提示糖尿病肾病模型造模成功；对照组、中药(TCM)组与模型组相比明显降低(P<0.01)，而对照组与中药组之间无显著区别(P>0.05)。
2.2 各组大鼠Cr和BUN比较
见表2。表2 各组大鼠Cr和BUN比较（略）
Cr和BUN模型组与正常组相比显著升高(P<0.01)，对照组、中药组与模型组相比明显降低(P<0.01)，但对照组、中药组BUN仍明显高于正常组(P<0.01)，对照组与中药组之间差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3 各组对大鼠肾组织CTGF mRNA表达的影响
见表3。表3 各组对大鼠肾组织CTGF mRNA表达的影响（略）
RT-PCR半定量分析显示，模型组大鼠肾组织中CTGF mRNA表达较正常组显著增高(P＜0.01)，CTGF在中药组和对照组大鼠肾组织中表达量均较模型组显著降低(P＜0.01)
3 讨 论
化瘀通络中药—肾络通系经验方，临床治疗多种肾脏病取得了良好效果，对糖尿病肾病蛋白尿的疗效尤为显著。我们提出了结合临床实践,认为糖尿病肾病属于病久瘀血入于肾络，肾络瘀阻所致，属于肾中络脉为病。前期研究证实［4］，化瘀通络中药对高糖诱导足细胞产生MMP9具有调节作用，本实验进一步证实其对DN模型动物的肾功能具有显著
的保护作用。 CTGF近年来发现的一种多功能细胞因子，它是一种富含半(CyR61)胱氨酸的多肽，是即刻早期基因CCN家族［包括CTGF、半胱氨酸蛋白61(CYR61)等］成员之一，有介导细胞的迁移、趋化、黏附、积聚，诱导增生、细胞凋亡和胶原生成的作用［1］。CTGF过度表达与增生性或纤维化性疾病的发生密切相关，在体内外转化生长因子β1(TGF-β1)可以特异性地诱导CTGF的表达，反过来CTGF又介导TGF-β对间质细胞的作用，可促进细胞增生和ECM合成等［5］。国内外均有研究报道［6，7］，在糖尿病尿白蛋白正常患者的肾组织中CTGF的表达已显著升高，随着糖尿病肾脏损害的加重CTGF的表达进一步增强，说明CTGF参与DN的发生发展，CTGF的表达高低并与糖尿病肾脏损害的程度密切相关。
在本实验中我们应用化瘀通络中药干预STZ制备的大鼠DN模型，检测了大鼠24 h尿蛋白、肾功能(Cr和BUN)以及肾组织CTGF mRNA表达的改变。结果表明，DN模型大鼠肾组织CTGF的表达显著升高，化瘀通络中药能够显著减少DN模型大鼠24 h尿蛋白，保护DN模型大鼠肾脏功能，并可从基因水平显著降低肾组织CTGF的表达，提示下调CTGF的表达可能是化瘀通络中药保护DN模型大鼠肾功能的重要机制。
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