hose of Guangxi Han nationality. ③HLADR4 and HLADR12 gene have no relation to bad pathological changes of Guangxi Chuang and Han nationalities IgA nephropathy.
【Key words】 IgA nephropathy;HLADRB1 gene;PCRSSP
IgA肾病是我国最常见的原发性肾小球肾炎，也是导致终末期肾病的主要病因。IgA肾病的发生与遗传因素、环境因素和机体免疫功能异常密切相关，其中遗传因素在本病的发生、发展过程中起重要作用。本课题组的前期研究表明HLADR12基因与广西汉族IgA肾病的发生显著相关〔1，2〕。壮族是中国人口最多的少数民族，主要分布在广西地区，本研究旨在进一步探讨HLADR基因与广西壮族IgA肾病的发生及病情进展的关系，同时探讨汉族与壮族IgA肾病的临床和病理表现差异。
1 对象与方法
1.1 研究对象 ①IgA肾病组：病例选自2001年2月～2004年3月在我院肾内科住院并经临床及病理检查确诊为原发性IgA肾病患者，均为广西籍人。壮族25例，三代均为壮族，患者之间无血缘关系，男8例，女17例，年龄14～57(平均34.0±11.3)岁，病程0.5个月～17年。汉族62例，三代均为汉族，患者之间无血缘关系，男32例，女30例，年龄15～53(平均29.7±10.9)岁，病程0.5个月～11年。临床、病理检查(光镜、免疫组化)排除了紫癜性肾炎、肝脏疾病所致的肾脏病变、系统性红斑狼疮等继发性IgA肾病。②正常对照组：110例。50例来自广西都安县壮族健康献血者，三代均为壮族，献血者之间无血缘关系，男18例，女32例，年龄18～45(平均29.2±5.6)岁;60例来自广西医科大学健康献血者，均为汉族，无血缘关系，男31例，女29例，年龄18～28(平均26.3±3.6)岁。均无IgA肾病及自身免疫性疾病史和家族史。
1.2 方法
1.2.1 DNA模板制备 取受检者外周静脉血2 ml(EDTA抗凝)，应用经典饱和酚/氯仿法提取。抽提后的DNA溶于TE溶液中测OD值及1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质与量，A260 nm/A280 nm均在1.75～2.0范围。
1.2.2 PCR扩增引物 参照Olerup〔3〕等方法设计等位基因序列特异性引物(SSP)：DRB1*04基因的上游序列为5′GTTTCTTGGAGCAGGTTAAAC3′，下游序列为5′CTGCACTGTGAAGCTCTCAC3′、5′CTGCACTGTGAAGCTCTCCA3′，扩增产物为260 bp 。DRB1*12基因的上游序列为5′AGTACTCTACGGGTGAGTGTT3′,下游序列为5′CACTGTGAAGCTCTCCACAG3′，扩增产物为248 bp。内对照引物:上游序列为5′TGCCAAGTGGAGCACCCAA3′,下游序列5′GCATCTTGCTCTGTGCAGAT3′，扩增产物为796 bp，均由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
1.2.3 PCR扩增体系及参数 每25 μl PCR反应体系加入4 μl DNA溶解液(含60 ng基因组DNA)，PCR缓冲液〔50 mmol/L KCl，1.5 mmol/L MgCl2，10 mmol/L TrisHCl(pH 8.3)，0.01% (W/V) 明胶〕，200 μmol/L的dATP、dTTP、dCTP、dGTP，1 μmol/L特异性引物，0.2 μmol/L内对照引物，1 U Taq DNA多聚酶，扩增进行30个循环。IgA肾病组：95℃预变性5 min，94℃变性30 s，DRB1*04和DRB1*12的退火条件分别为61℃ 30 s、62℃ 30 s，72℃延伸20 s，最后，72℃再延伸5 min。对照组：95℃预变性5 min，94℃变性30 s，64℃退火30 s，72℃延伸20 s，最后，72℃再延伸5 min。
1.2.4 PCR产物的检测 扩增产物经含有溴化乙锭的2%琼脂糖凝胶电泳，电泳缓冲液为1×TBE，电压120 V，电泳时间30 min，于紫外灯下观察扩增结果并拍照留记录。
1.2.5 临床资料 主要临床指标包括：血压、尿常规、24 h尿蛋白定量、血清肌酐、血浆总蛋白、白蛋白、血清免疫球蛋白(Ig)、血脂全套等。高血压定义为收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥9
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