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强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞HLA |
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官健 金大地 史占军 丁红 陆洁 曹琼 武大林
【摘 要】 目的 纯化强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞表面的HLA-B27抗原。方法 HLA-B27单抗(FD705)亲和层析法。结果 纯化的抗原蛋白经SDS-PAGE显示为单一条带，经分析其相对分子量为56 400。结论 经此法可成功纯化强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞HLA-B27抗原。
【关键词】 脊柱炎，强直性； 色谱法，亲和； HLA-B27抗原
Purification of HLA-B27 on peripheral blood mononuclear cells from patients with ankylosing spondylitis
GUAN Jian,JIN Dadi,SHI Zhanjun,et al.
Department of Orthopaedics,Nanfang Hospital,First Military Medical University,Guangzhou 510515,China
【Abstract】 Objective To purify HLA-B27 on the surface of peripheral blood mononuclear cells from patients with ankylosing spondylitis.Method Specific affinity column,cyanogen bromide-activated sepharose 4B column coupled to anti-HLA-B27 monoclonal antibodies,was used for HLA-B27 purification.Results The purified antigen by this method showed a single band by SDS-PAGE,with a molecular mass of 56 400.Conclusion HLA-B27 on the surface of peripheral blood mononuclear cells from patients with ankylosing spondylitis is successfully purified.
【Key words】 Spondylitis,ankylosing； Chromatography,affinity； HLA-B27 antigen
强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一种主要侵犯中轴关节，以骶髂关节炎和脊柱强直为主要特点的风湿性疾病。病因及发病机制迄今未明。AS和HLA-B27之间存在着密切联系。本实验采用亲和层析法对AS患者外周血中的单个核细胞表面的HLA-B27抗原进行了纯化，旨在为进一步研究HLA-B27在AS发病中的作用提供物质基础。
1 资料与方法
1.1 病例来源
2例AS患者(经两种方法，PCR-SSP和单抗板细胞毒反应，确定为HLA-B27阳性)，均发生双髋关节强直于屈髋位，于我院施行双侧全髋假体置换手术，收集术中失血备用。
1.2 方法
1.2.1 单个核细胞分离：采用Ficoll淋巴细胞分离液进行，收集上层细胞，用生理盐水反复清洗后－80℃冻存。
1.2.2 亲和层析柱的制备：采用溴化氰活化的Sepharose 4B(Pharmacia)，每毫升凝胶约连接HLA-B27单抗(FD705，Lambda)2 mg，4 ℃保存于Tris缓冲液(0.025 mol/L Tris，0.15 mol/L NaCl，0.02% NaN3，pH 7.3)中。具体制备方法参照文献［1］。
1.2.3 HLA-B27的纯化：参照Boisgérault等［2］的方法。具体如下：将分离的单个核细胞(108～109)裂解于TES (0.05 mol/L Tris，0.15 mol/L NaCl，5 mmol/L EDTA，pH 7.4)缓冲液中，其中含Aprotinin 1%，Pepstatin 10－5mol/L，Leupeptin 10-5mol/L，苯甲基磺酰氟化物2 mmol/L，碘化乙酰胺2.5 mmol/L，NP-40 1%，4 ℃处理1 h后，100 000×g离心1 h。取上清液按以下顺序过柱：①连接[1] [2] 下一页
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