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川芎嗪对慢性低氧高二氧化碳大鼠肺动脉压力及管壁胶原的影响 |
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［MeSH］ Drugs, Chinese herbal; Anoxia；Hypercapnia；Hypertension,pulmonary；Collagen
由慢性阻塞性肺部疾病（chronic obstructive pulmonary diseases, COPD）引起的肺心病为临床常见病、多发病，其发病的中心环节是肺动脉高压的形成，抑制肺动脉高压一直是肺心病防治的关键。本实验采用本研究室先期建立的与人类COPD病理生理改变相似的慢性低O2高CO2所致的肺动脉高压大鼠模型，观察川芎嗪对大鼠肺动脉压力及肺动脉管壁胶原的影响。
材 料 和 方 法
一、动物模型的复制
雄性Sprague-Dawley大鼠（本院实验动物中心提供）30只，体重180～280 g，适应性饲养1周后，随机分为3组。⑴正常对照组（A组），n＝10，作为常压氧下的对照；⑵低O2高CO2 4周组（B组），n＝10，置于常压低O2高CO2舱中（吸入气O2浓度为8.5%～11.0%，CO2浓度为5.0%～6.5%），每日10 h，其余时间与正常对照组在同一室内（室温15～20℃，相对湿度50%～70%）饲养到规定时间；⑶低O2高CO24周+川芎嗪组（C组），n＝10，川芎嗪购自无锡市第七制药厂，批号9610051，80 mg.kg-1.d-1，腹腔注射，其余条件同(2)组。
二、肺动脉和颈动脉平均压的测定
腹腔注射1%戊巴比妥钠35 mg.kg-1麻醉后，仰卧固定，作颈正中切口，自颈外静脉插管至肺动脉并行颈总动脉插管，分别连接YL-3和YL-4型压力传感器，输入SJ-42型生理记录仪测取平均肺动脉压（mean pulmonary arterial pressure, mPAP）和平均颈动脉压（mean carotid pressure，mCAP）。
三、血浆内皮素和血清NO-2/NO-3的测定
内皮素(endothelin, ET)放免试剂盒购自北京美迪科生物技术有限公司。血清NO-2、NO-3浓度之和（NO-2/NO-3）作为NO生成的指标，测定试剂盒(酶法)购自伊利康生物技术有限公司，按说明书操作。
四、电镜标本制作及观察
大鼠放血处死，立即取出完整肺，在肺门水平横切面切取1 mm×1 mm×1 mm大小肺组织各2～3块（每组4只），用2.5%戊二醛作前固定，1%锇酸作后固定，EPON812包埋，LKB-Ⅴ型超薄切片机切片，常规染色，H-600型透射电镜观察肺细小动脉内膜、中膜及外膜超微结构改变，并拍照。
五、Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组织化学检测（SABC法）
一抗：Ⅰ、Ⅲ型胶原兔抗鼠多克隆抗体（购自武汉博士德生物工程有限公司），二抗及检测试剂盒为SABC工作液，DAB显色，苏木素套染，阳性结果呈棕黄色。随机选取每只大鼠肺组织切片直径约100～200 μm之肺细小动脉5支，用图像分析仪心肺血管测定软件(华东理工大学研制)测取管壁平均吸光度值(LD)作为肺动脉管壁Ⅰ或Ⅲ型胶原的相对含量。
六、数据处理
数据以±s表示，采用SPSS软件进行组间t检验。
结 果
一、川芎嗪对慢性低O2高CO2大鼠平均肺动脉压和平均颈总动脉压及血浆内皮素、血清NO-2/NO-3浓度的影响
(一)由表1可知，低O2高CO2组（B组）mPAP值及ET含量明显高于正常对照组（A组）(P均＜0.01）， B组血清NO-2/NO-3浓度明显低于正常对照组（P＜0.01）；而低O2高CO2组（ B组）mCAP与正常对照组相比无明显差异（ P＞0.05）。
表1 平均肺动脉压(mPAP)、平均颈总动脉压(mCAP)、血浆内皮素浓度(ET)、血清NO-2/NO-3肺动脉Ⅰ型胶原平均吸光度值(LD Ⅰ)、Ⅲ型胶原平均吸光度值(LDⅢ)的变化
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