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膜环境高温对下丘脑神经元膜上钾通道电压依赖性的影响 |
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蔡春青 邹飞 朱受成
［摘 要］ 目的：观察膜环境高温对下丘脑神经元延迟整流性K＋通道(IK)电压依赖性的影响。方法：采用细胞贴附式的膜片钳技术。结果：高温可影响通道的电压依赖性，使电压依赖曲线发生正向移位，过高温度则使电压依赖性减弱甚或丧失。结论：IK电压依赖性的变化可能参与机体的发热和中暑发病过程。
［主题词］ 温度；钾通道；下丘脑；神经元
［中图分类号］ R594.1 ［文献标识码］ A
［文章编号］ 1000-4718(2000)05-0440-03
Effect of membrane environment at high temperature on voltage-dependence of delayed rectifier K＋ channel in hypothalamus neurons
CAI Chun-qing, ZOU Fei, ZHU Shou-cheng
(Department of Thermal Environmental Medicine, the First Military Medical University, Guangzhou 510515,China)
［Abstract］ AIM：To observe the effects of high temperature on voltage-dependence of delayed rectifier K＋ channel (Ik) in hypothalamus neurons.METHODS:The date recording from cell-attached patches of patch-clamp technique.RESULTS:With temperature raising, shift of voltage dependence may be mediated at different degree, while higher temperature might weaken and depressed. CONCLUSION:Shift of voltage dependence likely contributed to the body fever and heatstroke.
［MeSH］ Temperature; Potassium channels; Hypothalamus; Neurons
下丘脑神经元参与体温调节，有较强的温度敏感性［1］，由于膜的兴奋性与K＋通道有关，K＋通道的电压依赖性能够影响神经元动作电位的时相，为此观察热应激和热损伤温度对下丘脑神经元延迟整流性钾通道(IK)电压依赖性的影响，为揭示机体发热和中暑的机制提供一些线索。
材 料 和 方 法
一、新生大鼠下丘脑神经元的急性分离
取5～10 d SD大鼠，断头取脑，在解剖显微镜下分离出下丘脑，放入盛有常温人工脑脊液的离心管中，其成份(mmol/L)为：NaCl 140，KCl 5，NaHCO３ 20，NaH２PO４ 1，CaCl２ 2，MgSO４ 2，葡萄糖 10， pH 7.4，通O２平衡30 min后移放入新配置的2.5%胰蛋白酶-人工脑脊液3 mL中，消化15 min取出，用针头划成丝状，加入2 mL DMEM液吸入离心管中，Pasteur吸管连续吹打，分散游离细胞，取上部悬液加到已涂有0.1%的多聚赖氨酸盖玻片上静置。
二、神经元的温度处理
利用恒温灌流装置对浴槽液进行32℃、37℃、39℃和43℃温度液体的循环灌流，温度误差小于±0.5℃。40 min后对神经元进行单通道记录，浴槽液成份(mmol/L)为：NaCl 140，KCl 5，CaCl２ 2，MgSO４ 1，Hepes 10,TTX0.001，CdCl２0.2(Sigma)，葡萄糖10，pH7.4。
三、单通道记录和资料分析
实验在倒置显微镜下进行，用微电极液压操纵器(NARISIGE)控制电极接近神经元，记录用玻璃微电极阻抗为8～12MΩ，封接阻抗大于5GΩ，电极液成份同浴槽液。采用的记录模式除说明外均为细胞贴附式，使用PCLAMP 6.0.2程序通过Digita 1200(Axon instrument CO.USA)支持的CEZ-[1] [2] 下一页
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