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微量溶血分光光度法测定抗体形成细胞 |
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李康生 董 菁
中国图书分类号 R392.33
溶血分光光度测定(QHS)法是常用的抗体形成细胞功能测定法，它具有灵敏、稳定、客观等优点。QHS全量法在试管内进行，抗体产生细胞、补体和SRBC(绵羊红细胞)用量各为1.0ml，总体积3.0ml，用量较大及检测不便是全量QHS法的不足之处。我室将全量QHS法微量化(各种成分均为0.1ml)，反应在96孔板内进行，用酶标分析仪一次大量检测，收到较好的效果，现报道如下。
1 材料与方法
动物用昆明小鼠，每只用0.2ml SRBC(10%)腹腔免疫，免疫后5 d取脾脏制备单个细胞，用含Ca2+ 、Mg2+ 离子的PBS调成一定细胞浓度，每孔0.1 ml加入96孔板，再加0.2%SRBC 0.1ml/孔，补体用新鲜豚鼠血清（1:20稀释），每孔0.1 ml，实验孔总体积为0.3 ml。同时设细胞阴性对照、补体对照、SRBC对照及PBS空白对照（调零用）。实验及对照均设4个复孔。置37℃温箱1 h后，离心(2000r/min，10min)，取上清150μl，置酶标分析仪(3550-UV型，BIO-RAD)测定其吸光值(A)，检测波长415 nm(该酶标分析仪无413nm滤光片配备)。
2 结果
每次用SRBC免疫5d小鼠3只，制备单个脾细胞，用微量QHS法测定小鼠脾细胞对SRBC初次抗体产生情况。3次重复试验结果表明，微量法在4.0×106～6.25×104个脾细胞数量之间均有A值梯度变化，其中细胞数量在4.0×106～0.5×106 之间时，线性关系良好（细胞数量在4.0、2.0、1.0、0.5×106 时相应的A值分别为：实验1：0.768、0.582、0.322、0.164；实验2：0.898、0.602、0.368、0.238；实验3：0.820、0.508、0.308、0.170；复孔差值均小于10%。补体对照A值小于0.082，SRBC对照A值小于0.038）。
3 讨论
微量QHS法具有全量法敏感、稳定、客观等优点，同时节省了实验材料（仅为全量法的1/10量）。微量法在微孔板内进行，用酶标分析仪可在1 min内读完整块板并打印出结果。我室测定结果表明，微量QHS法是一种简便易行的细胞抗体产生能力的测定方法。
作者简介：李康生，男，45岁，博士，副教授，硕士生导师，主要从事神经内分泌免疫调节研究
作者单位：(汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室，汕头515031)
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