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丹参 泽泻 茯苓和茯苓皮对小鼠腹膜淋巴孔的影响 |
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李继承 丁伟勇 沈 毅 石元和 钟海玲 俞寿民 吕志连
中医治疗肝硬化有较好的疗效。然而，其促腹水转归机制尚不清楚。我们以往的研究已经发现腹膜淋巴孔是腹水转归的主要途径。最新的研究已经指出，药物可改变腹膜淋巴孔对物质吸收的速率。为此，我们从治疗肝硬化腹水的方剂中，筛选最常用，且代表不同中医辨证治疗的药物进行研究，以揭示中医中药促腹水转归的作用及其机制。
材料和方法
(一)实验药物：从中医文献检索中选择治疗肝硬化腹水的常规药物：丹参、泽泻、茯苓和茯苓皮。
(二)药物煎制：取丹参30 g，泽泻20 g，茯苓30 g，茯苓皮30 g。4种药分别煎汁，加水250 mL,浸渍10 min,文火煎，滤汁100 mL;第2次加水250 mL,文火煎至100 mL,二汁混合共200 mL.
(三)实验动物及分组：取健康成年NIH小鼠75只，体重18.5～24.0 g，雌雄不拘。随机分为：对照组、丹参组、泽泻组、茯苓组和茯苓皮组，每组15只小鼠。分别向腹腔内注入2.0 mL生理盐水、丹参液、泽泻液、茯苓液和茯苓皮液。20 min后，断头处死小鼠，取膈腹膜，置于4℃ 2.5%戊二醛(pH7.2)中。
(四)扫描电镜制样：将膈腹膜切成5 mm×5 mm，2.5%戊二醛和1%锇酸双固定，2%单宁酸液导电处理，梯度乙醇脱水，醋酸异戊酯置换。HCP-2型临界点干燥仪处理，IB-5型离子溅射仪镀金膜，Hitachi S 570扫描电镜观察，加速电压20 kV。
(五)计算机图象处理：
1.计算机图象处理系统组成：本实验采用扫描电镜与计算机联机数字图象处理系统。该系统由摄像机、A/D、IBM PC/AT和64级灰度/256种伪彩色的高分辩率多扫描彩色显示器包括(VGA适配卡)及应用软件组成。
2.系统的主要技术指标：(1)系统的灵敏度为0.25 Lux；(2)图象分辩率为512×512×8 bits(正常状态)和256×256×8 bits(增强采样状态)；(3)图象采集时间为20 S/帧，显示图象为64级灰度或256种伪彩色。
结果
在小鼠膈腹膜上，衬有单层间皮细胞。间皮细胞有两种形态，即扁平型和立方型间皮细胞。腹膜淋巴孔仅位于立方形间皮细胞之间，其形态和大小不一，但多以簇状分布。对照组和实验组腹膜淋巴孔的大小和分布密度存在明显差异。经图象处理，对照组腹膜淋巴孔平均直径为(1.26±1.20) μm；丹参组和泽泻组分别是(3.21±2.05) μm和(2.65±1.65) μm；茯苓组与茯苓皮组分别是(2.30±1.44) μm和(2.11±1.18) μm。应用方差分析(q检验)表明，丹参组和泽泻组均有显著开大腹膜淋巴孔的作用(P＜0.05)；茯苓组和茯苓皮组的作用不明显(P＞0.05)。从总体均数95%的可信区间值比较，发现丹参组和泽泻组腹膜淋巴孔值显著大于茯苓组和茯苓皮组。在对腹膜淋巴孔分布密度的测试中，发现对照组、丹参组、泽泻组、茯苓组和茯苓皮组平均分布密度分别是(133.89±74.17)个/0.1 mm2、(312.38±109.31)个/0.1 mm2、(264.33±124.86)个/0.1 mm2、(145.89±75.18)个/0.1 mm2和(126.56±73.64)个/0.1 mm2。结果显示，丹参组和泽泻组能显著增加腹膜淋巴孔的密度(P＜0.05)；茯苓和茯苓皮组则作用不明显(P＞0.05)。
讨论
我们最早发现人体腹膜淋巴孔。腹膜淋巴孔是腹膜毛细淋巴管在腹膜间皮细胞之间的微小开口，借腹膜淋巴孔，使腹膜腔与脉管系沟通。所以，腹膜淋巴孔是腹膜腔内物质转运的主要通道。此后，Tech的报道也证实人体腹膜淋巴孔的存在。然而，对于腹膜淋巴孔的药物调控研究则甚少。Tsilibary和Wissig 曾应用氨甲酰胆碱(carbacholine)和琥珀酰胆碱(succinylcgoline)静脉注射，使小鼠膈肌收缩或松弛，观察腹膜淋巴孔的调节。由于药物副作用太大，动物多因膈肌失去功能，死于呼吸衰竭。本文则选用治疗肝硬化腹水的中药，进行动物实验，以观察不同药物对腹膜淋巴孔的调节作用，探讨中医治疗腹水的机制。
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