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DNA片段的高效克隆 |
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NA) 比率1)
200 6.2 × 104／6.0 × 103 9／10
500 4.7 × 104／5.6 × 103 9／10
1000 2.5 × 104／4.6 × 103 10／10
1500 1.2 × 104／4.2 × 103 8／10
2000 1.2 × 104／6.8 × 103 6／10
1)白色菌落中插入目的DNA片段比率。
4 结论
在生物工程领域, 研究用试剂的试剂盒化已成为一个发展趋向。作为成套的试剂盒, 必须遵循使用方便、快速高效的原则。TaKaRa 的BKL试剂盒的整个操作过程只需90分钟便可完成从DNA片段末端平滑、5 磷酸化到DNA片段与载体的连接工作。并且每步反应都使用了TaKaRa独特的高效反应系统。如表1所示, 对200bp的DNA片段, 白色菌落的出现比例为91%; 对1 000bp的DNA片段, 白色菌落的出现比例为84%; 对 2 000bp的DNA片段, 白色菌落的出现比例为64%; 而且在白色菌落中有60%以上的菌体中的载体内插有目的DNA片段。特别是对1 000bp以内的DNA片段, 白色菌落中有90%以上的菌体内的载体中有目的DNA片段插入。TaKaRa BKL试剂盒除了适用于克隆PCR片段之外, 对染色体DNA的建库、鸟枪法测序时的随机DNA片段的建库也十分有用, 并可使任何DNA片段在短时间内克隆于平滑末端载体中。由于其具有使用方便、实用性强的特点, 深受科研人员的青睐。
作者简介:陈严(1967-), 女, 大连人, 复旦大学生物系生物化学专业1989年毕业, 学士学位。
作者单位：宝生物工程(大连) 有限公司 大连 116600
参考文献:
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〔2〕Hu M C, Davidson N. Mapping transcription start points onclonedgenomic DNA with T4 DNA polymerase:apreciseand convenient[J].Gene,1986,42:21～29.
〔3〕Soltis D A, Uhlenbeck O C. Independent locationsof kinase 3 -phosphatase activities on T4 polynucleotide kinase[J].J Biol Chem,1982,257:11340～11345.
〔4〕Midgley C A, Murray N E. T4 polynucleotidekinase; cloning of the gene (pseT) and amplification of its product[J].EMBO J,1985,4:2695～2703.
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