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BrdU抗原及抗体的制备 |
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李新明 赵学平 李新华 周晓健 何荣根
分类号：R392.33
溴脱氧尿嘧啶核苷（bromodeoxyuridine,BrdU）可替代DNA前体胸腺嘧啶核苷竞争掺入S期细胞DNA，取代 3H-TdR的应用，避免放射性污染，且检测方便省时。核苷属小分子半抗原，不能刺激机体产生抗体，需与大分子载体连接成完全抗原才引起宿主有效的免疫应答。本文将尿嘧啶核苷与卵清蛋白（ovalbumin,Ova）或牛血清白蛋白（burine serum albumin,BSA）共价结合，并证实偶联物具有免疫原性。
1 材料与方法
1.1 偶联抗原 用过碘酸氧化法偶合抗原［1］，脱氧尿嘧啶核苷与过氧化物不能反应，因此用
溴或碘尿嘧啶核苷（BrU或IU）分别与载体偶合成Ova-BrU,Ova-IU,BSA-BrU,BSA-IU。
1.2 偶联物测定 分别取偶联物1 ml经紫外分光光度计测定半抗原和载体的吸光密度值。小分
子核苷和大分子蛋白吸光后所得的光谱不同，前者和后者分别在260 和280 nm处有最大光密度值
（OD），据其比值可得半抗原浓度、载体浓度及载体与半抗原的克分子比［2］。核苷及蛋白的OD值
各测定3次，取均值。
1.3 制备抗血清 用偶联Ova的抗原免疫4只1.7～2.0 kg雄性新西兰白兔，偶联抗原加等量完全
福氏佐剂，首次免疫每毫升抗原佐剂加15 mg灭活卡介苗（BCG），以后每毫升加5 mg BCG,共免疫5
次，分离的血清经琼脂免疫双扩散检测，再用偶联BSA载体的抗原经ELISA间接免疫法行载体抑制
试验和抗血清效价测定。
2 结果
2.1 偶联物的吸光密度 各偶联物均为5 mg/ml左右浓度，吸收光谱的最大OD值分别为
Ova-BrU260（2.754）,280（2.926）;Ova-IU260（2.624）,280（2.800）,BSA-BrU260（0.435）,280
（0.635）;BSA-IU260（2.711），280（2.981）。
2.2 偶联物含量及克分子比 见表1。
表1 偶联物含量及克分子比
Tab.1 Content and molar ratio of coupled conjugations
Coupler Haptens
（mg/ml） Carriers
（mg/ml） Molar ratio
（carriers:haptens）
Ova-BrU 0.140 4.863 1:4.009
Ova-IU 0.138 4.803 1:4.013
BSA-BrU 0.141 4.870 1:4.011
BSA-IU 0.150 4.780 1:5.936
2.3 抗血清效价 免疫终止后，抗体最高效价达1：6.4×105。
3 讨论
本文成功地取得了1个载体连接4～6个半抗原的结果。通常认为连接5～15个半抗原分子为宜，也有认为每个载体仅接1个半抗原即足以产生抗体，载体所接的半抗原并非越多越好，覆盖的半抗原过多时影响载体与淋巴细胞或巨噬细胞表面受体结合，同样也影响有关的酶与载体接近，不利于抗体产生。本文通过30余次方阵滴定筛选ELISA包被等测定条件及载体抑制试验，证实所得抗血清为核苷半抗原所激发，完全可排除蛋白载体的影响。我们在后续研究中用此抗原及抗体掺入标记裸鼠肺转移癌模型，达到预期结果。■
作者简介：李新明，男，42岁，口腔颌面外科副主任医师，医学博士；
何荣根，男，64岁，口腔颌面外科主任医师，教授，博士生导师，主要从事肿瘤细胞
生物学研究
作者单位：李新明（河南医科大学一附院 郑州 450052）
赵学平（河南医科大学一附院 郑州 450052）
李新华（新乡市第一人民医院 新乡 453000）
周晓健（上海第二医科大学第九人民医院 上海 200011）
何荣根（上海第二医科大学第九人民医院 上海 200011）
参考文献：
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