醋酸乙酯萃取绿原酸过程研究

图1   萃取时间对绿原酸收率的影响（略）

　　2.5   多级萃取实验醋酸乙酯在原料液pH=1.5的条件下萃取绿原酸的分配比为0.69，在该萃取条件下，根据萃取公式计算，当有机相和水相体积比等于1时，进行N级萃取后，绿原酸的萃取回收率ρ=1－1/（1+K）N，通过计算，当进行4级萃取后绿原酸的萃取率可达87.74%。为此进行4级萃取实验：将50 g粗提粉用100 ml水溶解后，调节 pH=2.5，加入醋酸乙酯经过4级萃取，萃取液和萃余液分别进行浓缩、冷冻干燥得到产品。精密称取样品进行分析检测。结果见表3。

　　表3  四级错流萃取测定结果（略）

　　HPLC分析结果得出，产品中绿原酸含量35.2%，收率为90.52%，实验值和理论预测值吻合较好。根据绿原酸 UV法分析结果，产品中绿原酸含量为69.1%，收率为81.44%，这个结果比 HPLC法测定值偏高，表明产品中除绿原酸外还含有绿原酸的异构体、异绿原酸、咖啡酸等在327 nm处也有紫外吸收的物质。

　　2.6   萃取产物成分鉴定将萃取产品进行 LC-MS检测，液相流动相条件为：甲醇-0.5%乙酸溶液（40∶60）；检测波长为327 nm；柱温：25℃。图1所示为液相的紫外图谱，产品中有7个含量较高的化合物，分别对应于7个峰，峰1，2，3，4，5，6，7。其保留时间（tR）分别为2.260，2.684，3.176，3.709，4.831，5.483，8.879 min，峰1至7分别所对应的化合物准分子离子峰m/z依次等于377，377，377，391，539，539，539，均为［M+Na］+峰，计算出对应化合物的分子量分别为354，354，354，368，516，516，516。因此推断其中的峰1，2，3应归属为绿原酸及其同分异构体（理论分子量354.30），峰5、6、7归属为异绿原酸（理论分子量516.44）。峰1，2，3的二级质谱图中，出现了离子峰 m/z等于214.9的碎片离子峰(参看图3)，表明是绿原酸分子离子脱去咖啡酸后的奎尼酸。峰6和7的二级质谱图中，出现了离子峰m/z等于377的碎片离子峰（参看图4），表明是异绿原酸分子离子脱去一分子咖啡酸所得。推测峰4为绿原酸甲酯。

　　图2  萃取产物的 HPLC-MS谱图分析结果示意图（略）

　　图3  组分2质谱图（略）

　　图4  组分6，7的质谱图（略）

　　3  结论

　　对金银花粗粉在醋酸乙酯-水体系中的萃取分配系数测定得 D=0.69，表明醋酸乙酯是萃取绿原酸的适用溶剂，pH小于2的酸性条件下绿原酸的萃取收率高。实验结果表明，经过4级错流萃取，粗粉中将近90%的绿原酸被萃取到上相，所得萃取产品中绿原酸的含量经 UV检测为69.1%，经 HPLC检测为35.2%。对醋酸乙酯萃取产物做 LC-MS检测，结果推断产品中含有绿原酸和异绿原酸。

　　参考文献：

　　［1］  尉  芹，马希汉. 绿原酸及其提取分离方法评述［J］.中成药，2001,23(2):135.

　　［2］  刘军海，裘爱泳. 绿原酸及其提取纯化和应用前景［J］.粮食与油脂，2003，（9）：44.

　　［3］  国家药典委员会.中国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005：152.

　　［4］  林颖，吴毓敏，吴  雯，等. 天然产物中的糖含量测定方法正确性的研究

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