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雷公藤根醋酸乙酯提取物总二萜含量测定 |
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胡晓雪 卢 平 陈洪燕
已有大量报道的雷公藤有效成分雷公藤内酯醇Triptdide(甲素)、雷公藤内酯酮、雷公藤内酯二醇，均为二萜类成分，但是单独使用甲素则毒副反应发生率比雷公藤醋酸乙酯提取物增加49.33%，类风湿因子转阴率亦降低。从结构相似性看，其余二萜类成分如雷酚酮内酯、雷酚内酯甲醚雷酚新内酯，雷酚萜等可能在协助疗效及抑制毒性方面起一定程度的生源中间体作用［1］。所以我们对雷公藤根醋酸乙酯提取物的生产过程，以总二萜含量作为基本质量控制指标。
1 试样和仪器
雷公藤内酯醇由本院程自珍老师提供，确证为纯品。雷公藤根粗粉用95%乙醇回流提取3次，合并提取液回收溶剂至浸膏无醇味，再用醋酸乙酯少量多次洗提，合并提取液浓缩得提取物试样3批［2］，批号850808，911111，911206。所用试剂均为分析纯，分光光度计为上海仪器厂产721型分光光度计。
2 总二萜含量测定
取样品用95%乙醇溶解加入显色剂，据《中国药典》1995版附页分光光度法项下方法测定。显色剂为1% 3.5-二硝基苯甲酸乙酯溶液与NaOH乙醇溶液临用前1∶1混合。
2.1 测定波长选择：取甲素对照品溶液(123.33 mg/ml) 2 ml加入显色剂1 ml，以2 ml 95%乙醇为空白对照，在500～570 nm之间测定A值，确定测试波长为540±1 nm。
2.2 稳定性考察：同上波长测定项下样品制备，在10℃条件下每隔5 min测定1次，结果见表1。
表1 不同时间吸光度的测定
测定项 0min 2min 7min 12min 17min 22min 28min 32min
吸光度 A 0.450 0.420 0.390 0.370 0.355 0.342 0.332 0.329
测定项 37min 42min 47min 52min 57min 60min 62min 90min
吸光度 A 0.322 0.319 0.314 0.310 0.305 0.302 0.301 0.295
显色32 min后，30 min内测定值A标 RSD=2.6% (n=6)＜5%，确定显色30 min左右测定稳定性较好。
2.3 标准曲线制备：利用贮备母液配制浓度梯度为0、9.86、19.72、29.58、39.44、49.30、59.16 μg/ml的标准液，精密吸取3 ml加入1 ml显色剂，放置30 min后测定，以第1管为空白对照，测定A值作标准曲线图如下(见图1)：
2.4 样品测定：精密称取各批号样品一式两份于10 ml容量瓶中，95%乙醇溶解并稀释至刻度，精密吸取1 ml通过Al2O3柱，用25 ml乙醇洗脱挥干溶剂，用2 ml乙醇定容，对照品浓度29.87 μg/ml，同前方法测定，结果见表2。
2.5 重复性实验：取样品精密称定一式五份，依样品测定项的方法测定，结果分别为0.8500，0.7932，0.8331，0.8141，0.8053，均值0.8191%， RSD=2.8% (n=5)＜5%。
表2 3批样品吸光度及总二萜含量测定
批 号 吸光度 总二萜含量
(%) 总二萜平均
含量(%)
850808 0.214 0.7658 0.7676
0.242 0.7694
911111 0.238 0.7896 0.8576
0.258 0.9257
911206 0.200 0.7255 0.8018
0.246 0.8782
2.6 加样回收实验：精密称定提取物5份，分别加入398.2 μg甲素，同样品测定方法，结果见表3。
表3 加样回收率的测定
序号 加入量
(μg) 测得量
(μg) 回收率
(%) 平均回收
率(%) RSD
(%)
1 398.2 692.7 97.86
2 398.2 668.7 98.74
3 398.2 66[1] [2] 下一页
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