醋酸乙酯萃取绿原酸过程研究

　　1.2   工艺流程金银花粗提粉 →水溶 →醇沉 →蒸去乙醇 →醋酸乙酯萃取 →减压浓缩 →冷冻干燥金银花粗提粉水溶液的醇沉过程本文作者已进行了详细研究，确定最佳醇沉度为60%，醇沉可有效去除金银花粗粉中的杂质,有关研究另文陈述。醇沉后离心过滤，回收乙醇，剩余液用盐酸调节 pH后进行萃取。

　　1.3   绿原酸含量测定

　　1.3.1   UV法准确称取绿原酸标品10 mg，用50%甲醇定容至100 ml，分别用50%甲醇稀释10，5，3.33，2.5，2，1.67倍，以50%甲醇为空白，用1 cm比色杯于327 nm波长处测吸收度。以吸光度为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，绘制绿原酸标准工作曲线，得到回归方程：Y= 18.302X，r=0.999 5 。绿原酸含量在10.0～60.0 μg/ml，范围内，浓度与吸光度间呈良好的线性关系。

　　1.3.2   HPLC法含量测定色谱条件：参照2005年版《中国药典》附录中绿原酸的高效液相色谱法［3］。色谱柱：ZORBAX C18 ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液（13∶87）；检测波长为327 nm；柱温：25℃；进样量：20 μl。 线性回归方程：Y= 48.64X-52.57，r=0.999 1 。绿原酸在26.0～173.3 μg/ml与峰面积呈良好的线性关系。

　　1.4   总糖含量测定采用蒽酮硫酸法［4］。线性回归方程：Y= 196.96 X，r=0.998 9 。总糖在5.0～100.0 μg/ml范围内，浓度与吸光度间呈良好的线性关系。

　　2  结果与分析

　　2.1  原料含量分析将金银花粗提粉制成供试液，其中总糖含量为43.33%，总绿原酸含量为12.0%，绿原酸含量为5.5%（HPLC测定）。

　　2.2   金银花粗提粉在醋酸乙酯水体系中的 D值测定预先配制醋酸乙酯与去离子水体积比为1∶1混溶分相后的上、下相。随后称取10 g粗粉，溶于100 ml配制好的下相中，用浓盐酸调节 pH=2.0，量取50 ml该溶液，加入到100 ml分液漏斗中，加入等体积预先混溶过的醋酸乙酯，充分振摇20 min，达到平衡后，分出上、下相，分别取1 ml用甲醇稀释测定浓度。测得在醋酸乙酯-水体系中的萃取分配系数 D=0.69。参考绿原酸在其它溶剂体系［5］的 D值（见表1）可以看出，绿原酸在醋酸乙酯里的分配比较大，醋酸乙酯较正丁醇而言，沸点低，便于回收溶剂，且价格低廉。

　　表1   绿原酸在不同溶剂体系的 D值（略）

　　2.3  pH对萃取结果的影响分别称10 g金银花粗提粉配成50 ml水溶液，用一定浓度的盐酸溶液分别调 pH值为1.0，2.0，7.0，用醋酸乙酯按相比1分别称10 g金银花粗提粉配成50 ml水溶液，用一定浓度的盐酸溶液分别调 pH值为1.0，2.0，7.0，用醋酸乙酯按相比1∶1四级错流萃取，各自合并上相。用紫外测定产品中的总绿原酸和总糖量。结果见表2。1四级错流萃取，各自合并上相。用紫外测定产品中的总绿原酸和总糖量。结果见表2。

　　表2  不同 pH条件下萃取测定结果（略）
 
　　结果表明，pH小于2的酸性条件下绿原酸的萃取收率高，表明绿原酸以分子酸的形式更容易被萃取到有机相，但相应的产品中测到总糖含量也较高，分析认为，除了由于粗提物中的部分多糖被混溶到有机相的水带进产品以外，粗提物中的黄酮苷也被萃取到了有机相所致。

　　2.4  萃取时间对绿原酸收率的影响采用电磁搅拌装置考察醋酸乙酯对绿原酸的萃取速率。结果见图1。图1表明，醋酸乙酯萃取绿原酸的过程为一快速过程，3 min

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