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经椎间动脉栓塞法建立急性脊髓缺血损伤模型


材料与方法

  1. 实验分组:15只成年家犬随机分为3组:(1)对照组(3只):仅行选择性脊髓动脉造影,而不栓塞;(2)大颗粒组(6只):造影后,向1~8条椎间动脉内注入栓塞剂,2只犬分别选用直径为500~700 μm的聚乙烯醇颗粒( PVA, Cook公司,美国)和直径为700~900 μm的栓塞微球(Biosphere 公司,法国),另4只犬选用明胶海绵颗粒( GEF,读数显微镜下测得颗粒直径均在500 μm以上,平均1 mm左右);(3)小颗粒组(6只):造影后,向1~10条椎间动脉内注入直径为118~154 μm的小颗粒PVA。
  2. 实验方法:戊巴比妥钠麻醉后,右腹股沟韧带下切口, Seldinger法股动脉穿刺插管,在DSA监视下行动脉造影。造影剂选用碘普罗胺(Schering公司,德国)。用3F或4F导管,逐支行选择性肋间(腰)动脉插管造影,探寻发出根髓动脉者(图1)。 根据分组,经若干靶肋间(腰)动脉,徒手法注入栓塞剂。最后行主动脉造影,证实靶动脉已被栓塞(图2)。造影和(或)栓塞结束后,6-0缝线吻合股动脉插管处。



 图1 犬选择性脊髓动脉造影正位片示:前根髓动脉和脊髓前动脉,插管位置为左L5动脉



  图2 犬主动脉造影正位片示:靶椎间动脉(左L5动脉)已栓塞

  3. 观察项目:(1)神经学功能观察: 采用改良6级法[3]评估犬双后肢活动情况。0级:全瘫;1级:后肢肌肉可收缩,但不能站立;2级:后肢可站立,但不能走动;3级:后肢可走动,但有明显肌紧张,不能跑动;4级:后肢可跑动,有中度肌紧张;5级:正常。同时根据动物大、小便情况,观察括约肌功能。(2)组织形态学观察:椎板切除取脊髓,肉眼观察大体改变,甲醛固定,HE染色,光镜观察。病理学改变按Zivin等[1]标准分为3级:A:无损伤;B:中度损伤,斑点状、多灶及星状神经元缺失;C:严重损伤,大片完全性融合扩展的脊髓组织损伤。大、小颗粒组各2只犬脊髓标本行透射电镜观察。(3)影像学观察:大、小颗粒组各3只犬在处死前行MRI(0.5 Teslas)检查。

结  果

  1. 神经学功能:对照组:双后肢在栓塞后有一过性肌力下降,术后24 h肌力均恢复至5级。大颗粒组:双后肢在栓塞术后均有肌力下降,除1只外,另5只犬术后48 h均恢复至5级。小颗粒组:双后肢在栓塞后均降至0级,除1只犬仅恢复 1级外,其余均无恢复。肌力下降时,均伴有不同程度的大、小便失禁。
  2. 组织形态学观察:对照组:大体和光镜下均未见异常。大颗粒组:除1只外,大体和光镜下无明显损害表现。电镜检查示轻度缺血、缺氧性退变。小颗粒组:6只犬脊髓有不同程度水肿,有的形成空洞。光镜下均有中度或重度损害,形成范围不等的软化坏死灶(图3)。电镜下见神经元内线粒体肿胀,粗面内质网数目减少,染色质凝集成块;有髓神经纤维轴索收缩,髓鞘板层结构紊乱(图4,5)。



图3 小颗粒组犬脊髓组织重度损伤,灰质内大片坏死灶 HE×20



图4 小颗粒组犬脊髓神经元:线粒体肿胀,粗面内质网数目减少,囊池扩大,染色质凝集成块 铅-铀染色×10 000



  图5 小颗粒组犬脊髓有髓神经纤维:髓鞘板层结构紊乱,轴索收缩 铅-铀染色×3 500

  3. 影像学观察:脊髓MRI阳性表现出现于小颗粒组,表现为T1加权像上脊髓增粗,T2加权像上有明显的高信号区(图6)。

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