反应的作用。本组试验主要集中在NFκB 、TNFα和IL1β的水平表达方面，研究动物发生TBI并注射黄体酮后3种炎症因子在不同时相内的表达水平变化的影响，证实其在继发性脑损伤的保护作用。
材料与方法
1 材料
雄性Wistar成年大鼠(中科院上海实验动物研究所)，体重200～230g，黄体酮注射液(浙江仙琚制药股份公司，20mg/ml),其溶剂为二甲基亚砜(DMSO)。
2 模型制作、样本采集
随机分为4大组，每大组24只。(1)假手术组(sham组)，仅行右侧顶部开骨窗而无脑损伤;(2)TBI组，仅脑部创伤而无治疗;(3)PTBI组，创伤后黄体酮注射治疗;(4)DTBI组，创伤后注射二甲基亚砜(DMSO)。各大组再分为伤后1、3、5、7 天4小组，每小组6只。所有大鼠腹腔予20%乌拉坦(lg/kg)注射麻醉，用牙科钻于大鼠颅骨冠状缝后缘、中线右侧开直径5mm骨窗.保持硬膜完整。按Freeney自由落体撞击致伤方法，造成右顶脑挫裂伤。致伤直径4mm，深度5mm，打击能量1000g/cm2，致重型颅脑损伤。PTBI组0.8ml/kg于伤后1、6、24小时和1、2、3、4、5天腹腔内注射给药，DTBI组在相同时相内注射相应体积的DMSO。4组大鼠分别在伤后1、3、5、7天处死， 快速取全脑，以前囟中心为中心，垂直将脑切成4部分，然后水平切成腹侧和背侧部分。取右后方背侧部分，即是包括损伤区的脑组织。Sham组因1、3、5、7天4天的指标无显著差异，仅留第1天作为对照。
3 试剂
NFκB免疫组化试剂(一抗，武汉博士德生物工程有限公司)，TNFα、IL1β测定采用ELISA法，TNFα试剂(法国Diaclone公司)，IL1β试剂(比利时Biosource公司)。
4 统计学处理
所有结果经计算机运用SPSS 12.0统计分析软件进行，每个变量 以均数±标准差(±s)表示，统计学分析用ANOVA(LSD)方差分析及相关性分析，P<0.05 为差异有显著性统计学意义;P<0.01为差异有非常显著性统计学意义。
结果
1 脑组织NFκB变化
NFκB P65阳性细胞表现为棕色细胞核和细胞质，主要参与表达的细胞是血管内皮细胞和神经胶质细胞。Sham组NFκB P65阳性细胞在脑实质细胞中表达率为(17.33±6.43)%(图1a)，TBI组第1天表达为(65.75±17.41)%，与sham组比较增加575%(图1b)，TBI组第3天NFκB p65表达达到高峰为(97.43±7.57)%，与sham组比较增加850%(图1c)，伤后7天仍保持在较高水平(见图1d)。而注射黄体酮后1、3、5、7天组NFκB阳性细胞在神经胶质细胞及血管内皮细胞的表达均被明显抑制(见图1e、f)，注射DSMO(DTBI)无变化。TBI组NFκB p65阳性细胞数在脑实质细胞中百分比，伤后1、3、5、7天比Sham组显著升高(P<0.01);PTBI组脑组织NFκB p65阳性率比TBI组低(P<0.05)，而在DTBI组无显著变化(见图2)。
2 脑组织TNFα变化
与sham相比，TBI第1天就增高到达高峰(2.68±0.24)pg/mg，以后逐日下降，伤后7天 TNFα水平较伤后第1天明显下降为(1.66±0.27)pg/mg，但仍显著高于sham组(P<0.01)，PTBI组相应时间点脑组织TNFα水平比TBI组显著降低(P<0.05)，而DTBI组无显著变化(见图3)。
3 脑组织IL1β变化
TBI第1天就增高到达高峰为(17.81±3.16)pg/mg，以后逐日下降，伤后7天 IL1β水平较伤后第1天明显下降，为(10.24±2.56)pg/mg，但仍显著高于sham组(P<0.01)，经黄体酮治疗后各相应时间点IL1β水平明显下降(P<0.05)，而DTBI组无显著变化(见图4)。
a.Sham组伤后在血管内皮细胞和胶质细胞无明显阳性表达;b.TBI后1天NFκB P65活性明显增加，可见大量棕色阳性细胞;c.TBI后第3天NFκB P65表达达到高峰;d.TBI第7天NFκB P65仍有明显阳性表达;e.黄体酮治疗后(PTBI)第1天NFκB P65阳性细胞明显较TBI第1天减少;f.黄体酮治疗后(PTBI)第3天NFκB
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