脑膜瘤血管内皮细胞生长因子与瘤周脑水肿关系的研究

脑膜瘤血管内皮细胞生长因子与瘤周脑水肿关系的研究

同济医科大学附属协和医院神经外科  张志强   赵洪洋  朱贤立

摘　要　目的：了解血管内皮细胞生长因子（VEGF）在脑膜瘤中的表达，探讨VEGF与瘤周脑水肿和微血管形成的关系。　方法：应用免疫组化和免疫印迹技术，检测33例脑膜瘤组织中VEGF蛋白表达与瘤周脑水肿和微血管形成的关系。　结果：脑膜瘤VEGF表达率75%（25/33），4例可疑表达。VEGF蛋白表达与PVBE（r=0.7352,P＜0.01）和微血管形成（r=0.6611,P＜0.01）存在肯定的相关关系。　结论：VEGF存在于脑膜瘤组织中，在瘤周脑水肿和微血管形成方面发挥重要作用。

关键词：脑膜瘤　内皮生长因子　脑水肿

　　脑膜瘤周围脑水肿由许多因素引起，脑膜瘤细胞诱导分泌的化学介质作用引起微血管通透性增加和病理性微血管生长是重要因素之一。在这些化学介质中，血管内皮生长因子(VEGF)被认为是作用最强、特异性最高的调控因子。脑膜瘤引起的脑和脑膜血供增加，必须有大量微血管生成，可能引起VEGF上调，增加微血管通透性，引起血浆渗漏加重瘤周脑水肿。我们检测脑膜瘤组织中VEGF免疫活性与瘤周脑水肿及微血管形成的关系。

材料和方法

　　1．病例和组织标本：随机选取1997年6月～1998年8月同济医科大学附属协和医院脑外科33例手术切除的脑膜瘤标本，男12例；年龄34～68岁，平均49.8岁。女21例；年龄14～67岁，平均45.9岁。脑膜瘤病理类型：合体细胞型8例，过渡细胞型7例，纤维母细胞型9例，血管母细胞型4例，乳头状2例，恶性3例。所有标本都具有最终的病理学诊断和可利用的颅脑MRI或CT。
　　2．水肿的估计：根据患者的头颅MRI或CT估计水肿程度，参考Goldman等［1］测量脑水肿方法。认真测量包括脑水肿在内的肿瘤大小及肿瘤本身大小，并比较二者之比，比值为1者无脑水肿；再结合有无脑室受压和中线移位确定水肿系数。分5级：0级为无水肿，1级为可疑水肿，2级为轻度水肿，3级为中度水肿，4级为高度水肿。
　　3．免疫组化染色及结果判断：常规LSAB技术，设置阳性和阴性对照。鼠抗VEGF单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，鼠抗VⅢ因子抗体为武汉博士德公司生产。结果判断：光镜下观察VEGF染色阳性细胞数，表达强弱用系数0～4表示，0为阳性，1为可疑阳性，2为弱阳性，3为中度阳性，4为强阳性。VⅢ因子染色，内皮细胞被染成棕色或棕褐色，成纤维细胞偶有着色，其它细胞不着色，先在低倍镜下全面观察切片确定血管最高密度区域，连续观察5个200倍视野微血管数（一个内皮细胞或一组内皮细胞即为一个微血管），求其平均数。
　　4．免疫印迹染色：肿瘤细胞提取液制备参考Jackson等［2］所用方法。缓冲液10 mM Tris,1.5 mM EDTA,1mM MDTT,10%甘油，pH7.4，匀浆后分别
4 ℃ 2000 rPm离心15 min,4 ℃ 18000 rPm离心30 min。将定量的细胞提取液在5%浓缩胶和12%分离胶行SDS-PAGE电泳，中分子量标准蛋白作标准对照，考马斯亮蓝染色，其余部分将蛋白转印至硝酸纤维素滤膜行免疫染色，对VEGF蛋白带观察比较。

结　果

　　1．VEGF蛋白表达：33例脑膜瘤标本进行VEGF免疫组化检测，25例明显着色,2例无染色,4例可疑染色,x±s为2.03±0.96。肿瘤细胞间均一染色，细胞巢内强染色，但细胞巢之间有轻微着色或无着色。一部分肿瘤细胞染色较浅，类似于对应标本的瘤周脑组织。一部分内皮细胞轻微着色。3例恶性脑膜瘤（P＜0.05）及肿瘤浸润边缘强染色，乳头状脑膜瘤、血管母细胞型及部分合体细胞型脑膜瘤染色较强（P＞0.05）。
　　2．微血管计数：脑膜瘤组织中小动脉、小静脉、毛细血管及内皮细胞均为VⅢ因子染色。不同类型肿瘤，同一肿瘤不同部位微血管密度不均。x±s为60.0±39.7,其中血管母细胞型（x±s为77.6±13.4，P＜0.05）和恶性脑膜瘤（P＜0.05）微血管计数稍高。
　　3．PVBE：33例脑膜瘤中29例有不同程度的脑水肿,17例患者有脑室受压和/或中线移位,水肿系数x±s为2.4±1.3。
　　4．免疫印迹染色：鼠抗VEGF单克隆抗体染色9例脑膜瘤标本7例表现分子量相当于23 KD VEGF特异蛋白带，余2例23 KD蛋白带较弱，23 KD

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