压力对体外培养的牛角膜内皮细胞的影响

    1.6  统计学方法  采用SPSS 11.5 软件包，对数据采用单因素方差分析。

    2  结果

    2.1  压力对bCEC细胞形态的影响  对照组牛角膜内皮细胞呈不规则形状，有多边形、梭形、类圆形等，均有一大而清晰的核，细胞基本融合，密度较大(见图1)。2.67 kPa组细胞在48 h内未发生形态变化，与对照组无明显差异。5.33 kPa组细胞在6、12 h时均未见明显改变，24 h时细胞立体感降低，36 h时胞浆内出现少量空泡，48 h时空泡增多，少数细胞皱缩，核浓缩。8.00 kPa组细胞在6 h时胞浆即出现空泡，12 h时空泡明显增多，细胞形态改变，呈扁平状，部分细胞内出现皱缩，核膜、核仁欠清楚，核膜破裂，核内染色质浓缩，细胞密度降低(见图2)，48 h时大量细胞变圆、脱壁浮起。

    2.2  压力对bCEC细胞超微结构的影响  对照组bCEC细胞膜边界清楚，形态规则，线粒体及粗面内质网丰富，细胞核膜完整，常染色质丰富（见图3）。2.67 kPa组细胞超微结构未见明显改变。5.33 kPa组24 h内未见明显改变，48 h时部分线粒体肿胀，嵴肿胀，排列紊乱，基质疏松，粗面内质网扩张明显，并见大小不等的空泡(见图4)。8.00 kPa组较前两组压力继续增高，细胞质内线粒体肿胀，嵴消失，空泡样变，粗面内质网呈空泡样扩张，细胞核内染色质粗细不均，出现核膜不连续、核固缩等损伤(见图5)。

    2.3  压力对bCEC细胞活力的影响  根据台盼蓝染色计算各组细胞死亡率（见表1）。经单因素方差分析，各组间数值差异有统计学意义（F=415.48，P=0.000）。2.67 kPa组与对照组比较，差异无统计学意义（P＝0.776），5.33 kPa组及8.00 kPa组与对照组比较差异均有统计学意义（P＝0.000）。三个压力组间比较，差异均有统计学意义（P＝0.000）。　　

    3  讨论

    角膜内皮细胞受到损伤后通过两种方式代偿功能：一是周边细胞的扩大和移行，二是细胞分裂增殖。目前对于人的角膜内皮细胞（human corneal endothelial cells，hCEC）有无增殖能力尚无定论，虽然在体外表现出潜在增殖能力，但在成人眼中尚未发现hCEC增殖[3]。年龄、内眼手术、外伤、眼内炎症、角膜内皮细胞的自发性变性和坏死等因素均可引起角膜内皮细胞数量减少，如低于生理临界值则将导致角膜水肿和混浊,因此,对于角膜内皮细胞的保护至关重要。

    迅速增高的眼压能导致角膜内皮细胞损害，使细胞密度急剧降低。孙蔚等[4]发现急性闭角型青光眼急性发作致角膜内皮细胞降低7.3%~33%,而慢性闭角型青光眼患眼仅下降1.7%,说明角膜内皮对逐渐升高的眼压有一定耐受能力，而迅速增高的眼压可使角膜内皮受损。

    既往认为，高眼压造成角膜损伤的主要机制为以下两方面：其一为高眼压使支配角膜的感觉神经三叉神经眼支受压迫及角膜缘血管网灌注量下降，引起角膜营养障碍及角膜低氧，使内皮细胞获得的能量减少，并引起房水动力学改变，造成细胞结构受损；其二为角膜内皮泵上的Na+-K+-ATP酶受到高眼压影响，导致离子主动转运障碍，造成角膜水肿及内皮细胞损害[5]。但细胞组织对于压力本身的承受能力是有限的，如机械压力对于眼内其他组织细胞如小梁细胞和视网膜细胞等均可以造成机械性损伤[2，6]，因此，除了以上因素外，压力对于角膜内皮细胞本身直接造成的机械损害也可能是角膜内皮失代偿的原因之一。本压力模型在保持其他培养条件相同的前提下对细胞施加不同程度的压力，所选择的压力2.67 kPa、5.33 kPa及8.00 kPa分别对应人正常眼压上限、中度升高的眼压及极度升高的眼压，以此观察压力本身对于细胞的影响程度。

    本研究发现，

上一页  [1] [2] [3] 下一页