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碱性成纤维细胞生长因子促进大鼠硬腭穿孔的愈合 |
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本研究用大鼠制作腭裂穿孔的动物模型，探讨bFGF对硬腭穿孔伤愈的作用。
材 料 和 方 法
一、材料
bFGF是基因重组产品即人类基因重组碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor, rhbFGF) ，由本校生物工程研究所提供。每支1600 u，白色粉状，用时用1 mL生理盐水稀释。
二、动物实验方法及分组
腭裂穿孔的动物模型：选用180～200 g SD大鼠60只（由本院动物所提供），雌雄不限，随机将大鼠分为实验组和对照组。经腹腔注射2%戊巴比妥钠(剂量0.2 mL/100 g) 麻醉后，在大鼠硬腭正中，距上中切牙远中0.5 cm处用尖刀将硬腭粘骨膜、硬腭骨组织以及鼻底粘骨膜全层切除，使口腔和鼻腔相通，制造出直径为0.3 cm大小的硬腭穿孔，随后用生理盐水冲洗伤口，并让其伤口自然愈合。2周后检查发现：术后所有大鼠均形成0.3 cm直径大小的硬腭部穿孔，并以其作为腭裂术后穿孔实验的动物模型。
自穿孔第2周起, 穿孔部位用生理盐水冲洗2～3次，将创口周围的食物残渣、坏死组织、污秽物质等冲洗干净，随后沿穿孔周边刮去部分上皮组织，让新鲜肉芽组织暴露。在穿孔表面放入明胶海绵，并在周边用针缝合固定之。实验组伤口滴入0.2 mL的bFGF，对照组滴入0.2 mL的生理盐水。手术当日定为0天，术后第1d按同样方法处理创口，即生理盐水冲洗后，实验组伤口滴入0.2 mL的bFGF，对照组滴入0.2 mL的生理盐水。连续5 d重复上述给药过程。分别于术后3 d、5 d、7 d、10 d取材，10%中性甲醛固定，取材，缓慢脱水，包埋制片，苏木素-伊红染色，在光镜下观察记录，术后观察肉芽组织生长情况，测量创面面积大小，计算愈合率，愈合率=(1-现伤口面积)/ 原伤口面积×100%。核仁形成区嗜银蛋白染色(silver staining nucleulus organizer regions, AgNORs)参见文献报道［4］，观察统计方法：在1 000倍油镜下对每例切片随机观察5个视野，每视野10个完整无重叠的成纤维细胞作AgNORs颗粒计数，以均数±标准差(±s)表示。采用t检验判断均数差异显著性。
结 果
一、肉眼观察
实验组经使用bFGF治疗后第1 d，穿孔边缘组织开始出现少许红晕，有少量新鲜肉芽组织，穿孔面积大小未见缩小; 第2 d与第1 d结果相似，同样创口表面没有发生特殊改变; 第3 d后在穿孔边缘的部分区域出现沿表面不规则增生的新鲜肉芽组织，呈岛状生长，沿穿孔边缘排列; 第5 d肉芽组织明显向心性、团块状、瘤样增生, 穿孔面积由于有来自不同方向生长肉芽组织而变得明显缩小, 穿孔处几乎由新鲜肉芽组织所替代;第7 d增生组织体积大于穿孔缺失组织，将穿孔部分完全封闭；第8 d肉芽组织体积缩小，见腭部粘膜有白色披膜在肉芽组织表面爬行；第9 d增生凸出的组织进一步变平整，第10 d肉芽组织及上皮与腭侧粘骨膜完全溶合于一起，增生组织变得平整，穿孔处被修复。而对照组伤口仅见薄层肉芽组织，伤口收缩不明显，口腔与鼻腔仍然相连通。
二、愈合率的比较
从第3 d起，各实验组的肉芽组织愈合率(%)明显高于对照组(P＜0.01) 见表1。
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