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肝素诱导结晶紫比色法检测成纤维细胞生长因子的生物活性 |
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叶春婷 李斯明 邹海燕 杨小红 叶惠贞
中国图书分类号 R392.33 Q342.4
摘 要 目的：为寻找一种简便、经济、灵敏度高而不需使用放射性同位素的生物活性检测方法对成纤维细胞生长因子(FGF)进行检测。方法：利用肝素对Balb/c 3T3细胞株进行诱导，然后运用结晶紫比色法对其进行生物活性检测。结果：最大吸光度 A值的一半为 0.315，所对应的 aFGF浓度为24 pg/ml，而没有肝素诱导的最大A值一半为 0.16，所对应的浓度为156 pg/ml。结论：肝素的存在提高了结晶紫法的灵敏度。因此是一种简便、快捷而值得推广应用的 FGF生物活性检测法。
关键词 成纤维细胞生长因子 结晶紫 肝素
Bioassay for fibroblast growth factor by crystal violet inducing with heparin
YE Chun-Ting,LI Si-Ming,ZOU Hai-Yan et al
(Guangzhou Red Cross Hospital,Guangzhou 510220
Abstract Objective：Fibroblast growth factor (FGF) is one of the important cytokines for wound healing.It can accelerate the regeneration of blood vessel,nerve and epidermis.To look for a bioassay of FGF that is not only easy,economic and high sensitivity ,but also not involving radioisotope such as 3H-TdR．Methods：The authors used heparin to induce the Balb/c 3T3 cells,and then the crystal violet colorimetric analysis(CVCA) was used to measure its boiogical activity .Results:It showed that the half-maximal of A value was stimulated by 24 pg/ml aFGF with inducing by heparin,while that was stimulated by 156 pg/ml aFGF without heparin inducing .Conclusion：The existing of heparin could enhance the sensitivity of CVCA.It may be an easy,sensitive and valuable method to popularize for FGF bioassay.
Key words Fibroblast growth factor Heparin Crystal violet
成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor, FGF)是一种重要的促创伤愈合因子，不但促进创面的愈合［1］，而且对血管和神经的再生有很强的促进作用［2］，成为当今研究的热点之一。无论是生化提取物还是基因工程产品，其纯度和生物活性都不断提高，这就要求相应的生物活性的检测手段也要不断进步。目前， FGF的生物活性检测法以 3H-TdR方法为主，因其使用放射性同位素，受设备和仪器的限制，加上操作繁琐，检测费用高，因此，我们致力于研究一种高灵敏度，操作简便而且经济的检测方法。
1 材料与方法
1.1 材料 aFGF：GIBCO BRL10μg/瓶；DMEM：GIBCOBRL ；结晶紫：中国远航化工厂 A.R；SDS：INDONESIA CHEICALS；新生小牛血清(NCS)，成都华西生化制品厂。
1.2 方法 于96孔平底板加入含10%NCS的 DMEM培养基，再加入10 ng/ml aFGF溶液进行倍比稀释，随后加入含 50μg/ml肝素钠的Balb/c3T3细胞悬液，于37℃5%CO2培养48h，去除上清，加入0.5%结晶紫溶液染色15min后，冲去染色液，于50℃烘干，加入 1%SDS溶液，振荡[1] [2] 下一页
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