有接种乙肝疫苗者均能免遭HBV感染，人群对乙肝疫苗的免疫应答存在明显的个体差异，据此可将接种人群分为应答者和无应答者。影响个体对乙肝疫苗应答能力的因素包括年龄、性别、疫苗的品牌、是否吸烟、HLA型别等，其中HLA在人类对乙肝疫苗的免疫应答中起重要作用。研究无应答人群的免疫遗传学背景，将有助于进一步完善无应答人群的HBV预防对策，也有助于进一步阐明人类免疫应答基因(Ir gene)的生物学意义。本课题选择湖北汉族人群进行乙肝疫苗标准全程接种，观察其应答水平，并分析该组人群HLA-I类表型频率，以探讨无应答人群与HLA-I类抗原多态性的关联情况。
1 材料与方法
1.1 主要材料 HLA-I类分型血清板(澳大利亚皇家佩思医院临床免疫科Dawkins教授惠赠)可检出HLA-A抗原特异性11种，HLA-B抗原特异性25种；血源型加热灭活乙肝疫苗(卫生部武汉生物制品研究所)；抗-HBs(EIA)酶免疫法试剂盒(上海实业科华生物技术有限公司)；RPMI 1640(Gibco公司)。
1.2 实验对象及接种程序 选择湖北省鄂州市汀祖镇王边村52名健康自愿者进行乙肝疫苗标准全程接种(第0、1、6月肌肉注射)，受试者年龄在10～40岁之间，其中男性28名、女性24名。在全程接种后8 w采集外周静脉血标本。
1.3 方法
1.3.1 外周血单个核细胞的分离 取2.5 ml全血与等量RPMI 1640培养液混匀，小心加在5 ml淋巴细胞分离液上，1 600 r/min离心30 min，收集单个核细胞层，用RPMI 1640培养液洗2次，离心去上清，重新用20%FCS RPMI 1640培养液悬浮，调整细胞浓度为1×106个/mm3。
1.3.2 HLA-I类抗原分型 采用国际通用的微量淋巴细胞毒试验。简言之，在含有已知HLA-I类抗血清的反应板中加入外周血淋巴细胞，然后加入兔补体，充分作用后加入染料，在倒置相差显微镜下判断结果。阳性细胞着色且体积增大，表示待检淋巴细胞表面具有已知抗血清所针对的抗原；存活细胞不着色，透明而较小。
1.3.3 抗HBs抗体测定 取受试者血清，借助酶免疫法(EIA)检测抗HBs抗体水平。简言之，加入待测标本于包被HBsAg的反应板中，设抗HBs抗体阴性对照和阳性对照各2孔，空白对照1孔，然后加酶结合物，充分混匀，孵育37℃ 1 h，洗涤后加底物液，置37℃孵育15 min，然后加终止液。用酶联检测仪测定OD492nm值，按下列公式计算并判断结果S/N：
。
由于多种因素可能影响EIA检测结果，为避免实验操作而致的误差，对每份样本连续检测3次，取平均OD值判断结果。S/N≥2.1为应答者，S/N＜2.1为无应答者。
1.4 统计处理 相对危险性(Relative risk,RR)按Woolf公式：RR=ad/bc。a为携带特定HLA型别的无应答者人数；d为不携带特定HLA型别的应答者人数；b为不携带特定HLA型别的无应答者人数；c为携带特定HLA型别的应答者人数。四格表卡方检验按公式： 。 如1＜T＜5、
N＞40，则采用校正公式：
2 结果
52名受试者HLA-I类分型结果和抗HBs抗体水平见表1。52例中无应答者为10名(19.0%)，应答者为42名(81.0%)。HLA-I类抗原型别与乙肝疫苗无应答的相关性见表2。10名无应答者中携带HLA-B39表型者为3人，其比例明显高于应答者(42人)中携带HLA-B39表型者(1人，χ2=5.22，P＜0.05，RR=17.5)。42名应答者中携带HLA-B62表型者为14人，而10名无应答者中无一人携带HLA-B62(χ2=6.41，P＜0.05)。此外，HLA-A2、A24、B16、B17、B40、B46等表型与乙肝疫苗免疫应答无明显关联。其他HLA型别由于在本实验中检出的频率较低，无统计学意义。
上一页 [1] [2]
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文