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胃泌素和生长抑素对人十二指肠粘膜表皮生长因子含量的影响 |
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中的作用及胃肠激素对EGF分泌的调节尚不十分清楚。本研究通过体外实验进一步探讨胃泌素和生长抑素对正常十二指肠和Du旁粘膜EGF含量的影响。
材料与方法
一、研究对象：
正常对照组10例，男6例，女4例，年龄20～56岁，平均(41.0±10.3)岁；活动期Du组16例，男10例，女6例，年龄22～58岁，平均(43.5±14.1)岁；愈合期Du组12例，男7例，女5例，年龄18～61岁，平均(44.4±14.8)岁。所有对象均为随机收集经胃镜检查和粘膜活检组织学检查确诊者。无其他系统慢性疾病。检查前1周内未服用制酸剂、H2受体阻滞剂、铋剂、抗生素及非甾体类消炎镇痛剂。
受检者均于胃镜直视下活检取材。对照组于十指肠球部近端2.0cm、Du患者于溃疡边缘分别取活检组织6块用于EGF检测。常规另取标本做病理组织学检查。
二、标本处理和EGF测定：
粘膜取材后用pH7.4的KHb(Krebs－Henseleit bicarbonate)缓冲液冲洗2次，将粘膜按每块一组放入含10%FCS的RPMI 1640(GIBCO 公司)培养液1.0mL中，37℃稳定30min后，分别加入五肽胃泌素(pentagastrin,中国科学院上海东风生化技术公司)100μg/L和200μg/L、八肽生长抑素类似物奥曲肽(octreotide,瑞士SANDOZ公司)10μg/L和20μg/L及五肽胃泌素200 ng加奥曲肽20μg/L，以PBS作为空白对照。置37℃孵育箱中培养24 h后，加入1500 U／管抑肽酶，匀浆，4℃下2 500r/min 离心15min，上清液置－30℃保存。匀浆蛋白含量采用改良Lowry氏法测定。EGF采用中国同位素公司北方免疫试剂研究所提供的hEGF试剂盒进行放射免疫测定。同时制备混合匀浆上清液及加入不同剂量的hEGF作为质控样本进行内部质量控制，批内变异系数为4.8%,批间变异系数11.2%，与胃泌素、生长抑素和转换生长因子α均无交叉反应。实验样品均用复管测定取均值为测定结果。
结果数据均以±s表示。3组间均数差异显著性检验用F检验，组内均数差异显著性用t检验。
结 果
活动期Du旁粘膜EGF含量分别显著低于正常十二指肠(P＜0.05)和愈合期Du旁粘膜(P＜0.01)，愈合期Du旁粘膜EGF含量高于正常十二指肠(P＜0.05)。五肽胃泌素可显著增加正常十二指肠和活动期及愈合期Du旁粘膜EGF含量，五肽胃泌素100μg/L可分别使正常十二指肠、活动期和愈合期Du旁粘膜EGF含量增高146%±64%、214%±101%和170%±43%，三组比较增高的百分比幅度差异无显著意义；五肽胃泌素200μg/L使活动期和愈合期Du旁粘膜EGF增高300%±108%和249%±39%，显著高于正常十二指肠粘膜195%±66%的增高幅度(P均＜0.05)。奥曲肽10和20μg/L可显著降低愈合期Du旁粘膜EGF含量(P分别＜0.05和＜0.01)，正常十二指肠和活动期Du旁粘膜EGF含量也有所减少，但与空白对照比较差异无显著。奥曲肽(20μg/L)具有显著抑制五肽胃泌素(200μg/L)增加正常十二指肠及Du旁粘膜EGF含量的作用(表1)。
表1 五肽胃泌素和奥曲肽对正常十二指肠和Du旁粘膜EGF含量的影响
Tab 1 Effects of pentagastrin and octreotide on EGF contents in normal mucosa and adjacent ulcer mucosa of duodenum(±s)
Treatment Dose
(μg/L) Mucosal EGF(ng/mg pro)
Normal(n＝10） A－Du(n＝16） H－Du(n＝12）
Vehicle — 5.56±2.32 3.22±2.46* 8.67±3.02*△△
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