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镉中毒诱发的自由基对红细胞损伤及带3蛋白表达的影响 |
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叶煦亭 沙继宏 郑尊 于秉学 李津婴 杨勇骥 吴越
【摘要】 目的 研究镉离子诱发的过氧化氢与红细胞损伤及带3蛋白(band3)表达的关系。方法 应用免疫扫描电镜示踪带3蛋白及铈细胞化学法显示过氧化氢。应用X射线能量失散谱对Cd的细胞分布进行了分析。结果 红细胞膜表面不但有大量过氧化氢反应标志，而且带3蛋白表达明显减少且细胞畸变。结论 结果提示，镉离子能诱发自由基的大量产生，导致红细胞膜及其骨架的自由基损伤，从而影响红细胞的稳定性和变形性及带3蛋白的表达。
【关键词】 镉 自由基 红细胞
The Correlation of Free Radicals Induced by Cadmium Toxicess with Erythrocyte Injury and band3 Expression YE Xuting, SHA Jihong, ZHENG Zun, et al. The second Military Medical University, Shanghai 200433
【Abstract】 Objective To study the correlation of hydrogen peroxide induced by cadmium ion with erythrocyte injury and band3 expression. Methods It was application immunoscanning electronmicroscopy and cytochemistry and EDX methods. Result Cadmium ion not only induced a lot of hydrogen peorxide but also caused serious distortion of erythrocyte. Conclusion Cadmium ion-induced free radicals lead to oxygen free radical damage of membrance and crytoskelecton of erythrocyte, affecting the stability and deformability and band3 expression in erythrocyte.
【Key words】 Cadmium Pree radicals Erythrocytes
镉(Cd)对健康的危害已引起人们的重视。目前认为镉离子能非竞争性抑制Ca2+-ATP酶的活性，替代某些酶的金属离子(Zn2+、Fe2+等)以及可能诱发自由基的产生，使脂质过氧化，导致细胞膜流动性、通透性以及膜受体等发生改变［1，2］。带3蛋白是细胞阴离子交换蛋白，也是红细胞膜的主要含糖内在蛋白，其降解产物可能是老化红细胞的识别抗原。我们分析了Cd及其诱发的自由基对红细胞的损伤以及对带3蛋白表达的影响。
材料与方法
1.铈细胞化学样品的制备：选用200～250 g Wistar大鼠，腹腔注射氯化镉溶液0.2 ml(10 mg/kg生理盐水稀释)。1小时后用抗凝管在腹动脉收集红细胞，漂洗后加入氯化铈溶液(配方：CeCl3 1 mmol/L，NaCl 140 mmol/L，KCl 4 mmol/L，MgCl2 1.2 mmol/L，CaCl2 2.4 mmol/L)后 5分钟，再以2%多聚甲醛-1％戊二醛固定1小时。随后按常规透射电镜制样法制备红细胞样品。超薄切片经铀、铅染色。日立H-800透射电镜观察。收集镉中毒红细胞按常规透射电镜制样法制备X射线能量失散谱（EDX）样品，用覆有Formvar膜的镍网收集超薄切片，直接经EDAX-9100能谱仪分析。正常红细胞铈细胞化学实验组为对照组。
2.band3免疫标记扫描电镜样品制备：合成大鼠膜外侧片段12肽，以碳二亚胺作交联剂，将12肽与铜蓝蛋白交联。交联物与福氏全佐剂混合乳化免疫纯种新西兰兔，每2周加强免疫1次。交联物与不完全佐剂混合，免疫3个月，颈动脉放血，离心得抗band3抗血清，抗体经纯化及免疫印迹确定［3，4］。镉急性中毒的红细胞以抗凝管收集。HEPES(羟乙基哌嗪乙硫磺酸洗液)漂洗后，PLP(多聚甲醛-赖氨酸过碘酸盐)固定液固定约2小时，0.05 mol/L TBS(Tris 缓冲生理盐水)漂洗3次，每次10分钟。1%卵蛋白封闭20分钟。band3抗体1∶[1] [2] 下一页
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