|
孕期自发性高血压鼠服卡托普利预防子鼠高血压及其机制 |
| |
type Ⅰ angiotensin Ⅱ receptor,AT1)是其功能受体。Wu［1］等在与人EHT相近的自发性高血压鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)孕期及子代发育早期连续服用转换酶抑制剂(angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI)卡托普利(Captopril,Cap)，发现能延缓子鼠血压的升高，机制待阐明。本研究则单纯在SHR孕期服用Cap，以观察孕期干预对子鼠血压的独特影响，并通过其对血浆和组织ATⅡ浓度及组织AT1受体mRNA表达的改变，探讨有关RAS的作用机制，阐明RAS在SHR发病中的重要地位。
材料与方法
(一)动物和材料：
1.动物：SHR、Wistar京都大鼠(Wistar Kyoto rat,WKY)由上海市高血压研究所提供。
2.试剂：β-巯基乙醇(Sigma)；异硫氰酸胍、鼠白血病病毒反转录酶、RNA酶抑制剂(GIBCO BRL)；dNTP、随机引物、Tag DNA聚合酶(Promega)；AngⅡ放射免疫试剂盒(上海市高血压研究所)。
3.引物合成：AT1受体、β-actin引物分别根据文献［2，3］报道cDNA或特异引物序列，采用DNA合成仪合成，引物序列①AT1受体(第137-452 bp，共316 bp)，上游5’-ACA GCT TGG TGG TGA TTG TC-3’，下游5’-ATG ATG CAG GTG ACT TTG GC-3’；②β-actin(540 bp)，上游5’-GTG GGC CGC TCT AGG CAC CAA-3’，下游5’-CTC TTT GAT GTC ACG CAC GAT TTC-3’。
4.主要仪器：PCR热循环仪480型(PERKIN ELMER)。
(二)动物分组与干预：选SHR雌雄各9只，于12周龄时，随机配对并分3组(SHR、Cap-1、Cap-2)，每组3对；WKY雌雄各3只，也于12周龄时配对饲养。其中，Cap-1组：亲代于交配、怀孕、哺乳期服卡托普利(江苏常州制药厂)，子代断乳后续服至12周龄，卡托普利溶于水中，剂量为100 mg.kg-1.d-1，每周按体重调整剂量，为全程给药组；Cap-2组：亲代于交配、怀孕期服卡托普利(剂量及给药方法同Cap-1组)，哺乳期及子代断乳后均不给药，为单纯孕期给药组；SHR和WKY组：亲代、子代均不服药，分别为不干预的高血压和正常血压对照组。各组分笼饲养，室温(22±4)℃，均选用雄性子鼠实验。
(三)体重、心率、血压测定：自4周龄开始测体重，每周1次，心率、收缩压自8周龄始，用尾套式血压计(上海市高血压研究所研制)测定，每周1次。测压前大鼠经37℃预热15 min。
(四)血浆、组织AngⅡ浓度测定：参照文献［4］，用放免法测定20周龄大鼠血浆、大脑皮质、肾皮质、心室肌AngⅡ浓度；以考马斯亮蓝染料法测组织蛋白浓度。
(五)组织AT1受体mRNA测定：采用反转录-聚合酶链式反应(reverse
transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法测定各组20周龄大鼠的大脑皮质、肾皮质、心室肌AT1受体mRNA。参照文献［3］略作修改。即用酸-异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法抽提总RNA后行2种特异引物的RT-PCR。其PCR条件分别为：AT1首次循环94℃ 3 min，64℃ 1 min，72℃ 2 min，接着94℃ 45 s，64℃ 1 min，72℃ 45 s，共30个循环；β-actin 94℃ 45 s，60℃ 1 min，72℃ 45 s，首次循环94℃ 3 min，共30个循环；2种PCR结束前均72℃ 20 min。PCR产物分别经1.5%琼脂糖凝胶电泳、溴乙锭染色、摄片、光密度扫描，待测物基因表达量与相应β-actin光密度进行标准校正。
(六)数据均以±s表示，组间比较采用单因素方差分析。显著性标准P＜0.05。
上一页 [1] [2]
上一个医学论文： 体外循环前后心肌和血清地高辛浓度的变化及影响其变化的多因素分析
下一个医学论文： BrdU抗原及抗体的制备
|
|
|
|
|
|
|
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 基础医学论文 >> 正文