系统性红斑狼疮患者外周血辅助性T淋巴细胞表型分析及与疾病活动性的相关性

　　系统性红斑狼疮(SLE)患者免疫系统的主要异常是依赖于T细胞的B细胞功能亢进，产生大量 的自身抗体和免疫复合物［1］，根据产生的细胞因子的不同，人CD4＋T细胞(辅助 型T细胞)至少可分为三种功能亚型：Th1细胞生成白细胞介素-2(IL-2)，干扰素-γ(IFN -γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)；Th2细胞生成IL-4、IL-5、IL-6和IL-10；Th0细 胞可生成两类细胞因子［2］。本文运用流式细胞仪采用三色荧光标记分析SLE患者外 周血单个核细胞(PBMC)的CD4，CD25以及CD30三种表面抗原的表达，试图通过这些表面标记 反映Th细胞的量的变化，激活状态以及活化细胞是否分泌Th2细胞因子，并探讨这些表达与S LE疾病活动性的相关性。

　　1　资料与方法

　　1.1　临床资料：23例SLE患者男性1例，女性22例，年龄13～58岁，病例组均受治于同济医 院内科，根据ACR标准确定诊断［3］，患者均未合并炎性感染，其中10例患者已接受 激素治疗(强的松1～2 mg·kg－1.d－1，口服)，13例患者尚未接受任何治疗 。10名健康献血者作为正常对照组，男性2名，女性8名，年龄22～31岁。

　　1.2　标本处理：静脉采集的外周血(肝素抗凝)在4 h内进

　　行分析，首先经Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液(pharmacia)离心分层，取出中间层的PBMC 置于5 ml Falcon试管，每试管的100 μl细胞悬液中含大约105个细胞，采用三色免疫荧 光染色。

　　1.3　细胞染色：20 μl异硫氰酸荧光素(FITC)标记的小鼠抗人CD30单克隆抗体，20 μl藻 红蛋白(PE)标记的小鼠抗人CD25单克隆抗体和20 μl Cy-chrom标记的小鼠抗人CD4单克隆 抗体(购自PharMingen公司)分别加入待测试管，相应标记的小鼠IgG亚型抗体作为阴性对照 。试管置于4 ℃暗处反应30 min后用磷酸盐缓冲液(PBS，pH 7.4，含1%叠氮钠和0.5%白蛋 白)清洗离心，吸去上清液后用300 μl 1%多聚甲醛固定待用。

　　1.4　流式细胞仪分析：运用FACScan流式细胞仪(Becton Dickinson)进行细胞表面抗原分 析，仪器提供前向散射光(FSC)，侧向散射光(SSC)以及不同波长的荧光(FL1，FL2，FL3)等 参数，在FSC-SSC二维点图上确定出淋巴细胞的分布，随后在FL1-FL2及FL2-FL3二维点图 上进行细胞各表面标记的分析，每份标本分析10 000个细胞。

　　1.5　SLEDAL评分：SLE疾病活动性运用SLEDAL标准评分［4］：中枢神经系统表现( 癫痫、精神病、器质性脑病、视觉障碍、颅神经病变、狼疮性头痛、脑血管意外)各计8分， 血管炎计8分，关节炎和肌炎各计4分，肾脏表现(管型尿、血尿、蛋白尿、脓尿)各计4分， 新发皮疹、脱发和黏膜溃疡各计2分，胸膜炎和心包炎各计2分，低补体血症和DNA结合率增 高各计2分，发热、血小板减少和白细胞减少性血症各计1分，总分105分。

　　1.6　统计学处理：分别计算SLE患者组与正常对照组细胞阳性率的中间值，下25%至上25% 的区间值用以反映变化范围，运用Mann-Whitney检验进行SLE组与对照组的表面抗原比较； 运用Spearman检验进行表面抗原与疾病活动性SLEDAI评分的相关性分析，设定P＜0.05 为统计学上有显著意义。

　　2　结　　　果

　　2.1　细胞表面抗原表达：病例组及正常对照组的血液标本在采集后及时加以染色分析以尽 可能反映细胞在体内的状况。SLE患者标本的流式细胞仪分析图谱FL1-FL3和FL2-FL3二维 点图显示单个细胞水平上淋巴细胞的三种表面抗原的表达。经统计分析SLE患者PBMC中CD4 ＋细胞较正常对照组显著减少(P＜0.05)，二者的中间值分别为36.2%和30.6%。SLE 组的CD4＋CD25＋细胞的百分率中间值为8.9%，较正常组的7.0%显著增高，P＜0 .05。正常组与SLE组的PBMC几乎均无CD4＋CD30＋细胞表达，也未见CD4－CD30＋ 细胞。

　　2.2　SLEDAI评分：23例SLE患者中，22例伴有肾脏病变，20例伴有关节炎和/或肌炎，20例 伴低补体血症和/或DNA结合率增高，18例有皮疹和/或脱发和/或黏膜溃疡，16例伴发热，14 例外周血中血小板减少和/或白细胞减少，13例伴有胸膜炎和/或心包炎，4例合并血管炎，4 例合并中枢神经系统病变。患者的临床疾病活动性SLEDAI评分范围为14～38分

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