集反应。
2.2 pgB在小鼠体内表达的观察 免疫组化结果示：实验组与阳性组结果一致，免疫后第2、4、6周免疫组化结果均可见HSV1 gB蛋白在视网膜、三叉神经节、脑组织中持续表达，大部分细胞核呈棕黄色，免疫组化呈阳性结果(见图1)，说明接种重组质粒pgB后，pgB在小鼠体内能表达HSV1gB蛋白。而载体对照组和空白对照组同阴性结果一致，未见视网膜、三叉神经节、脑组织细胞呈棕黄色改变(见图2)，免疫组化结果为阴性。
3 讨 论
HSV1是双链线性DNA病毒，其感染在全世界非常普遍，不仅可产生原发性感染，而且还能产生潜伏感染和复发性感染。人群中约有90%以上的人曾感染过HSV1，其危害已引起人们的广泛重视。HSV1是引起病毒性角膜炎、病毒性脑膜炎、口唇生殖器黏膜和新生儿感染的主要病原体。近年来由于抗菌素和皮质类固醇的广泛应用和滥用，使HSV1感染具有明显上升的趋势。
经过二十几年的不断发展，HSV1感染的治疗已取得了明显的进步。从非选择性的竞争抑制病毒DNA酶的抗疱疹病毒类药物，到比较有选择性的病毒核苷激酶的抗HSV1药物;再加上干扰素及不同类型的抗病毒药物的联合应用，使HSV1感染的发生控制在较低的水平。但由于抗生素、激素的不合理使用，病毒耐药株的不断出现，机体的免疫功能受到干扰，一些药物全身应用时对肝肾功能、造血系统的影响，以及对HSV1潜伏机制尚不清楚等，使其在临床应用时受到限制，迄今还未达到理想的治疗效果〔5〕。目前针对HSV1的感染尚无特效疗法，核苷酸类似物及其磷酸衍生物是病毒复制的抑制剂，但不能有效地抑制HSV1的复发感染，国内外许多学者认为针对病毒的特异性自动免疫是控制HSV1的最有效途径。因此HSV1疫苗是治疗和预防单纯疱疹病毒感染的重要研究方向〔6〕。
根据感染特点，可将HSV1疫苗分为抗原发性感染的预防性疫苗和抗复发性感染的治疗性疫苗。HSV1疫苗按其特点和作用机制可分为灭活病毒疫苗、减毒活疫苗、亚单位疫苗、肽疫苗、活载体疫苗和核酸(基因)疫苗〔7〕。基因疫苗是近十几年才发展起来的一项新的生物技术，其作为第三代疫苗的地位已得到了确认。基因在体内的表达及诱生免疫反应的过程，模拟了自然状态下机体感染外源性病原微生物表达抗原及诱导免疫的过程，可以诱导机体全面的细胞免疫和体液免疫应答，在胞内寄生病原体的疫苗防治上具有广阔的应用前景〔8〕。基因疫苗的具体免疫机制尚不十分清楚，但根据目前的研究资料来看，基因疫苗免疫机体后在细胞内表达，合成的抗原蛋白既可以诱导MHCⅠ限制的CD8+细胞毒性T细胞应答〔9〕，也可以诱导MHCⅡ限制的CD4+T细胞应答。同时，也有一部分抗原多肽直接呈递给B细胞，引发特异性体液免疫应答〔10〕。本研究利用经鉴定已构建成功的基因疫苗pgB免疫接种小鼠，进行了初步的动物实验，确定pgB能否在动物体内正确表达，是决定pgB能否作为基因疫苗的关键。
DNA疫苗接种方式的不同决定了不同的转染效率和抗原递呈效率。对于疫苗接种的途径，一些学者认为眼周局部接种疫苗引起的眼部保护作用优于系统免疫(肌肉免疫接种)〔11〕，而另一些学者认为重组杆状病毒表达系统表达的HSV1 gD和gB蛋白疫苗的系统免疫不仅可减少潜伏感染和复发感染，而且能有效的抑制病毒在体内潜伏〔12〕。此外，还有研究结果显示疫苗在病毒攻击实验中有效的免疫保护作用与接种途径无关，多种不同的免疫反应参与抗HSV1的感染中，CD4+和CD8+在预防眼部HSV1感染中都起了一定的作用。诱导的免疫也取决于免疫途径，一般来讲，肌肉注射是有效的，可以产生良好的保护作用，肌肉注射应用最早也最广泛〔13〕。本实验采用的是肌肉注射法，在视网膜、三叉神经节、脑组织都分别检测到了有HSV1 gB蛋白的表达。本实验初步证实了肌肉免疫可使pgB在眼内、三叉神经节及脑组织可持续、稳定表达，为今后pgB在基因治疗方面进行深入地研究奠定了基础。
【参考文献】
1 孟祥俊,贺 冰，冯 非，等.单纯疱疹病毒1型糖蛋白B基因疫苗的构建〔J〕. 吉林大学学报(医学版)，2004;30(5)：71720.
2 傅继华.病毒学实用实验技术〔M〕.山东科学技术出版社，2000：6070.
3 Ferenczy MW. Prophylactic vaccine strategies and the potential of therapeutic vaccines against herpes simplex virus〔J〕.Curr Pharm Des，2007;13(
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