胞百分数半定量评分,来曲唑组大鼠卵巢ObR相对表达量[2.5(2～3)]明显高于正常组[1(1～2)]和溶剂组[1(1～1.75)]，差别具有统计学意义(P<0.05，图2);而正常组和溶剂组之间差别无统计学意义(P>0.05)。
A：正常组;B：溶剂组;C：来曲唑组. ObR阳性染色者在细胞质和/或细胞膜中可见棕黄色和/或黄色着色颗粒, 阳性细胞分布不均匀, 多呈散在片状或灶状分布，细胞核未见阳性细胞染色，来曲唑组其阳性表达明显强于正常组和溶剂组.
2.6 卵巢中ObR mRNA表达结果 PCR产物电泳进行产物鉴定，扩增片段大小和设计的内参基因(170 bp)和目的基因(125 bp)扩增长度一致(图3)。实时荧光相对定量分析结果如表3所示，卵巢中ObR mRNA在来曲唑组的表达均显著高于正常组和溶剂组(P<0.01)。
3 讨 论
PCOS主要表现为稀发排卵或者不排卵，生育力低下，是引起女性不排卵性不孕的主要原因。LEP是由肥胖基因编码的16 kD的糖基化蛋白，除参与调节机体能量代谢和脂肪聚集外，还参与神经、内分泌和生殖系统的调节。ObR在中枢和外周组织均有选择性表达，包括下丘脑、脂肪组织、卵巢、睾丸等组织，LEP通过结合靶组织上的ObR激ObR:瘦素受体. 1：marker;2：βactin;3：ObR.
活胞内信号传导因子及转录家族蛋白后发挥作用。国外报道在卵巢中未检测到ob基因的表达，提示卵巢本身并不产生LEP，卵泡液中的LEP来源血清[8]。表3 大鼠卵巢中ObR mRNA实时荧光相对定量PCR结果
LEP作为一种旁分泌因子，通过其受体直接作用于卵巢颗粒细胞而参与卵巢功能的调节，因此笔者考虑PCOS卵巢的改变可能与LEP及其受体的异常调控存在某些联系。Panidis等研究发现，PCOS可能与循环LEP水平的异常调节有关，PCOS妇女的生殖功能可能比相同体质量的无PCOS的正常妇女更易受LEP的影响[9];另外,在PCOS患者的卵巢，可能存在固有的LEP反应异常，这种异常可能是由于其卵巢内的分泌异常，或受体水平、受体后信号传导的单个或多个内在缺陷所致靶细胞对LEP反应异常，故ObR在卵巢内的作用可能有更深远的意义。
本实验采用来曲唑诱导建立PCOS大鼠模型。来曲唑为一种非甾体类芳香化酶抑制剂，它能使T和雄烯二酮在芳香化酶的作用下转变成雌二醇和雌酮的过程受到抑制，导致雄激素水平升高并发展为多囊卵巢[10]。结果表明，本实验建立的PCOS动物模型均表现出类似人PCOS的临床特征，主要表现为大鼠体质量升高、动情周期失去规律性变化，血清学提示有高雄激素、高胰岛素、高LEP及胰岛素抵抗的改变，卵巢体积及质量增加，肉眼见卵巢表面较苍白，白膜增厚，较多囊状扩张的卵泡，镜下见较多的小卵泡，闭锁卵泡，囊状扩张卵泡明显增加，颗粒细胞层数2～3层，卵泡内卵母细胞或放射冠消失，黄体数量明显下降并伴有不完全的黄素化，故认为用来曲唑诱导的动物模型是较理想的PCOS大鼠动物模型，符合实验需要。
近来有研究发现，在不同发育阶段的卵泡检测到LEP mRNA的阳性信号,提示LEP可能参与卵巢的类固醇激素分泌功能。而PCOS患者原始卵母细胞LEP高表达，提示其异常的卵巢状态可能与卵巢水平的LEP异常分泌有关，可能同时存在受体或受体后水平的调节异常[11]。本实验从ObR的角度出发，探讨受体调节对PCOS异常卵巢状态的影响。实验发现来曲唑组大鼠血清中LEP明显升高，免疫组织化学结果证实在大鼠卵巢中有ObR的表达，并运用免疫组织化学半定量评分和Real Time RTPCR检测均得出来曲唑组卵巢ObR表达较正常组升高的结果。Sirotkin等报道人卵巢颗粒细胞体外培养的过程中，LEP能直接抑制胰岛素样生长因子I(IGFI)对协同FSH促颗粒细胞合成E2的作用，提示LEP对卵巢功能有抑制作用，有可能阻断优势卵泡的选择及卵泡发育，导致无排卵发生[12]。近来有研究发现，在性未成熟的大鼠,给予高剂量的LEP，可降低血浆孕酮、卵巢前列腺素E的水平,也降低排卵率，体外培养的排卵前卵泡及卵巢组织块的研究也显示了同样的结果，即降低排卵率、降低孕酮和卵巢前列腺素E的释放。表明高剂量LEP作用于受体可抑制排卵，也可能是由于直接或间接影响前列腺素、氧化亚氮等卵巢因子而引起[13]。本研究中检测出PCOS大鼠卵巢ObR表达显著升高，结合血清LEP的升高和卵巢的病理改变，也提示高剂量LEP作用于受体可抑制排卵。Yin等对体外培养的正常及具有PCOS肥胖女性黄体颗粒细胞的研究表明，LEP增
上一页 [1] [2] [3] [4] [5] 下一页
您现在的位置： 绿色健康网 >> 医学论文 >> 妇产科论文 >> 正文