【摘要】 目的 研究来曲唑诱导建立多囊卵巢综合征(PCOS)动物模型中卵巢组织瘦素受体(ObR)及其mRNA的表达，探讨卵巢ObR变化与PCOS发病机制的关系。 方法 6周龄清洁级雌性SD大鼠45只，分为正常组、溶剂组和来曲唑组，各15只。正常组每日自由摄取食物和水;溶剂组每日给予1%羟甲基纤维素水溶液2 mL/kg灌胃;来曲唑组以来曲唑0.5 mg/kg灌胃。观察大鼠体质量、动情周期、卵巢质量及其形态学改变，测定血清黄体生成素(LH)、睾酮(T)、胰岛素(INS)、瘦素(LEP)及血糖(FG)水平，采用免疫组织化学和Real Time RTPCR方法检测大鼠卵巢中ObR及其mRNA的相对表达，并对3组的各指标进行比较。 结果 来曲唑组大鼠体质量和卵巢质量指数升高，动情周期消失，卵巢体积增大，白膜增厚，HE染色可见较多囊状扩张的卵泡且黄体数量明显下降，血清T、LH、INS、LEP水平明显升高(P<0.05);卵巢ObR及其mRNA表达明显增强(P<0.05)。 结论 来曲唑诱导建立的PCOS动物模型临床表现与人类似;卵巢中ObR表达上调，可能是导致PCOS患者不排卵、生育力下降的原因之一。
【关键词】 多囊卵巢综合征; 卵巢; 瘦素; 胰岛素敏感指数; 疾病模型
多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是生育年龄妇女常见的内分泌紊乱性疾病，以卵巢的功能紊乱为特征，常表现为不孕和肥胖，但其发病原因目前尚无定论。瘦素(leptin，LEP)是肥胖基因(ob基因)的表达产物，近年来的研究认为, LEP是营养与生殖之间的代谢信号，它在生殖方面有许多重要的调节作用[12]。研究还显示，LEP存在于卵泡液中,且LEP受体(ObR)在人卵巢中几种不同的细胞上也有表达，表明LEP能够对性腺行使直接的作用[3]。笔者通过研究PCOS大鼠卵巢中ObR及其mRNA的表达情况，探讨其与PCOS发病机制的关系，现报告如下。
1 材料和方法
1.1 PCOS动物模型 6周龄清洁级雌性SD大鼠，购自中国科学院上海实验动物中心[许可证号：SCXX(沪)20070005]，平均体质量180 g，二级动物房饲养，恒温22 ℃，光照12 h、黑暗12 h交替，自由摄取食物和水。每日定时作阴道涂片检查，选择动情周期4～5 d，连续2个正常动情周期的大鼠即开始用于实验，共选出45只，分为正常组、溶剂组和来曲唑组，各15只。来曲唑组每日给予溶解在1%羟甲基纤维素水溶液(CMC)2 mL/kg的来曲唑(芙瑞，江苏恒瑞医药股份有限公司)0.5 mg/kg灌胃，连续21 d[45];正常组每日自由摄取食物和水;溶剂组每日给予CMC 2 mL/kg灌胃。
1.2 大鼠体质量及动情周期 每日同一时间称量大鼠体质量，同时进行阴道脱落细胞涂片，瑞氏染色后显微镜下观察细胞形态的变化，确定大鼠动情周期的情况。
1.3 大鼠血清中各项指标 末次给来曲唑24 h后，禁食8 h，对所有大鼠进行下腔静脉取血，采用放射免疫分析法测定大鼠血清黄体生成素(LH)、睾酮(T)及胰岛素(INS)、LEP，试剂盒购自天津市协和医药科技有限公司，批内和批间变异系数分别<10%和<15%。血糖(FG)测定采用葡萄糖氧化酶法，计算胰岛素敏感指数(HomaIR)：
HomaIR=FG×FINS/22.5
1.4 卵巢标本采集及处理 腹腔注射水合氯醛(0.3 mL/100 mg)麻醉，打开腹腔，用去RNA酶处理过的机械取出双侧卵巢，去除表面脂肪组织并称质量，一侧用10%中性福尔马林固定后石蜡包埋，留作光镜下(HE染色)观察卵巢形态学改变和免疫组织化学实验;另一侧存于-80 ℃冰箱，留作PCR检测。
1.5 卵巢中ObR表达 常规石蜡包埋，连续冠状切片，厚4 μm，共3套，分别用于HE染色、免疫组织化学染色及其对照试验。按Elivision免疫组织化学方法进行操作，一抗为羊抗兔LEP受体抗体1∶100(北京中杉金桥生物技术有限公司)，25 ℃过午;二抗50 μL为羊抗兔(福州迈新生物技术开发有限公司)30 min，DAB显色3～5 min，苏木素复染1 min。结果判定参照文献[6]，阳性为细胞内出现黄色颗粒。按染色强度与阳性细胞百分数判定，>50%细胞着棕黄色为强阳性，评3分;<50%细胞着棕黄色或>50%着黄色为阳性，评2分;<50%细胞着黄色或均着淡黄色为弱阳性，评1分;不着色为阴性，评0分
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