。每个标本观察8个视野，双盲法评估结果。
1.6 卵巢中ObR mRNA的表达
1.6.1 总RNA提取 每100 mg组织加1.0 mL的Trizol溶液，充分研磨组织后，室温静置5 min。加0.2 mL氯仿用力振荡15 s，室温静置5 min。4 ℃，12 000 r/min离心15 min。吸上清，加入等体积(约0.5 mL)的异丙醇，混匀后室温静置10 min，12 000 r/min离心10 min。弃上清，留取沉淀。加1 mL现配的75%的乙醇(预冷)振荡洗涤RNA沉淀1次，12 000 r/min离心5 min。弃上清，加20 μL的焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶解RNA。
1.6.2 Real Time RTPCR 采用Takara 公司SYBR PrimeScript RTPCR Kit(Perfect Real Time)，引物由上海生工生物工程技术有限公司合成：
ObR(125 bp)：
F：5’GTTCCAAACCCCAAGAATTG3’
R：5’TCAGGCTCCAGAAGAAGAG3’
βactin(170 bp)：
F：5’CTAAGGCCAACCGTGAAAAG3’
R：5’ACCCTCATAGATGGGCACAG3’
1.6.3 产物鉴定 取5 μL PCR产物加1 μL上样缓冲液加样，于2%琼脂糖凝胶上进行电泳，以50～500 bp DNA ladder作为Marker。电泳电压125 V，凝胶图像分析仪(Del Doc1000，美国BioRAD公司)分析并摄像，观察PCR扩增结果。
1.6.4 实时定量PCR结果 采用比较阈值法测定目的基因的相对表达[7]：
目的基因的相对表达量=2_△△Ct，
△△Ct=(△Ct，目的基因△Ct，内参基因)实验组(△Ct，目的基因△Ct，内参基因)对照组
每份样本均重复2次，取其平均值。
1.7 统计学处理 数据以SPSS 13.0统计软件进行处理。大鼠体质量用x±s表示，各组之间差别采用单因素方差分析;卵巢质量和血清各项指标均以中位数表示，各组之间的比较采用非参数检验-秩和检验
2 结 果
2.1 各组大鼠体质量和卵巢质量比较 给药前3组大鼠体质量比较，差别无统计学意义(P>0.05);模型建立21 d后，来曲唑组的大鼠体质量和卵巢质量指数均明显升高,与正常组及溶剂组比较，差别均有统计学意义(P<0.05，表1)。表1 模型建立后大鼠体质量和卵巢质量指数的比较 卵巢质量指数=卵巢质量/大鼠体质量×100. 与正常组比较，▲：P<0.05.
2.2 大鼠动情周期 正常组和溶剂组阴道脱落细胞变化符合正常大鼠动情周期，来曲唑组在给药第5天起，陆续出现动情周期消失，且均处动情间期时相，即仅见大量白细胞，偶见少量角化细胞，提示无排卵。
2.3 卵巢组织学变化 肉眼观察：正常组和溶剂组表现为卵巢色泽红，未见囊状扩张卵泡;来曲唑组为卵巢表面苍白，白膜增厚，体积增大，可见较多囊状扩张的卵泡。组织切片HE染色，正常组和溶剂组示多个黄体及不同发育阶段的卵泡，卵泡内颗粒细胞呈多层，多为8～9层，卵巢白膜较薄(图1A，1B);来曲唑组示有早期发育的较多的小卵泡及闭锁卵泡，囊状扩张卵泡明显增加，颗粒细胞层数减少至2～3层，卵泡内卵母细胞或放射冠消失，黄体数量明显下降并伴有不完全的黄素化，卵巢白膜较厚(图1C)。
2.4 血清中各项指标测定 来曲唑组大鼠血清中INS、T、LH、LEP、HOMAIR明显高于正常组和溶剂组(P<0.05)，正常组和溶剂组之间比较无统计学意义(P>0.05)，见表2。表2 各组血清中各项指标的测定结果FG：血糖;INS：胰岛素;T：睾酮;LH：黄体生成素;LEP：瘦素;HOMAIR：胰岛素敏感指数. 与正常组比较，☆：P<0.05. A：正常组(×100)：多个黄体及不同发育阶段的卵泡，卵泡内颗粒细胞呈多层，卵巢白膜较薄;B：溶剂组(×400)：卵泡内颗粒细胞呈多层，多为8～9层;C：来曲唑组(×100)：有早期发育的较多的小卵泡及闭锁卵泡，囊状扩张卵泡明显增加，颗粒细胞层数减少至2～3层，卵泡内放射冠消失，黄体数量明显下降并伴有不完全的黄素化，卵巢白膜增厚.
2.5 卵巢中ObR的表达情况 根据染色强度与阳性细
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