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高效液相色谱法测定儿腹康口服液中秦皮甲素及盐酸小檗碱含量 |
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王海波 张永光 孙波 杨峻峰
摘要：应用HPLC法同时测定儿腹康口服液中秦皮甲素和盐酸小檗碱的含量。以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，采用梯度洗脱，流动相Ⅰ∶甲醇∶水(27∶73)，流动相Ⅱ：乙腈：0.05mol/L十二烷基硫酸钠溶液(54∶46)，检测波长354nm。本法样品液制备简便，重现性较好，回收率秦皮甲素为99.75%，盐酸小檗碱为100.59%。
关键词：@儿腹康口服液/化学；@秦皮甲素/化学；@盐酸小檗碱/化学；色谱法，高效液相色谱
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1003-9783(1999)06-0370-02
儿腹康口服液由秦皮、黄连、白头翁、米壳等五味中药组成，主要用于婴幼儿病毒性腹泻。本文采用高效液相色谱法对方中主药的主要成分秦皮甲素和盐酸小檗碱进行含量测定，方法简便，实用性较强，现报道如下。
1 材料和方法
1.1 仪器与试药 美国Waters600高效液相色谱仪；Waters486紫外检测器；PC800工作平台。
秦皮甲素(740-9403)、盐酸小檗碱(713-9304)对照品均由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯，其余一般试剂均为分析纯。儿腹康口服液为本研究所制备。
1.2 色谱条件 WatersNova-PakC18色谱柱(3.9mm×150mm×4μm)、Nova-pakC18保护柱。采用梯度洗脱。流动相Ⅰ：甲醇：水(27∶73，36%醋酸调pH3.6)；流动相Ⅱ：乙腈：0.05mol/L十二烷基硫酸钠溶液(54∶46，冰醋酸调pH4.8)。用流动相Ⅰ洗脱6min后，改用流动相Ⅱ洗脱。检测波长为354nm，灵敏度：0.08AUFS，流速：0.7ml/min，柱温：室温。20ml/min氦气脱气。理论塔板数以盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。
在此条件下，秦皮甲素和盐酸小檗碱与其它组分均能达到较好的分离效果，且空白对照无干扰(见图谱1、2、3)。
图1 儿腹康口服液的HPLC图谱
a.秦皮甲素 b.盐酸小檗碱
图2 混合对照品溶液的HPLC图谱
a.秦皮甲素 b.盐酸小檗碱
图3 缺秦皮、黄连空白对照液的HPLC图谱
1.3 测定方法
混合对照品溶液的制备 分别取秦皮甲素和盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，用30%甲醇溶解，稀稀定容，制成每1ml含秦皮甲素0.027mg、含盐酸小檗碱0.053mg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备 取本品5支混合，精密吸取1ml，置10ml量瓶中，加30%甲醇溶液稀释至刻度，经微孔滤膜滤过，即得。
精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪中，按外标法以峰面积积分值计算秦皮甲素和盐酸小檗碱含量。
1.4 线性关系
秦皮甲素的回归方程为：Y=78350X-104770,r=0.9998。表明秦皮甲素在0.20～1.00μg范围内有良好的线性关系。盐酸小檗碱的回归方程为：Y=536135X-493634,r=0.9999。表明盐酸小檗碱在0.80～4.00μg范围内有良好的线性关系。
2 结果
2.1 稳定性试验 精密吸取供试品溶液各20μl，分别于1、2、4、6h时进样，测定峰面积积分值。在6h内，秦皮甲秦RSD=1.36%，盐酸小檗碱RSD=0.39%，表明本品指标成分在6h内比较稳定。
2.2 精密度试验 精密吸取供试品溶液，重复进样5次，每次20μl，以峰面积求得RSD值。结果秦皮甲素RSD=1.16%，盐酸小檗碱RSD=0.51%。
2.3 重现性试验 取样品按［供试品溶液制备］的方法平行制备供试品溶液5份。按［样品测定］方法进行测定，结果秦皮甲素RSD=1.13%，盐酸小檗碱RSD=3.62%，RSD＜5%，表明本法重现性良好。
2.4 回收率试验 取已知含量的样品，精密添加适量秦皮甲素和盐酸小檗碱对照品，按［供试品溶液制备］方法操作。精密吸取上述溶液20μl，注入高效液相色谱仪进行测定。通过5批次的测定，儿腹康口服液中秦皮甲素的平均回收率为99.79%，RSD为1.72%；盐酸水[1] [2] 下一页
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