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同种异体腱移植重建膝关节交叉韧带的研究 |
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，分离获取细胞成分，调节浓度为1×109/L，将肌腱细胞悬液用4％锥虫蓝染色，低倍镜计细胞总数及被染色死亡细胞数，计算细胞活力，每根肌腱取3段的平均值为腱细胞活力测定值。细胞活力(％)＝(细胞总数死亡细胞数)/细胞总数×100％。
1.4.4 形态学观察 每组随机选取2个标本观察大体形态并取材行光镜及透射电镜观察。
1.5 统计方法 先用方差分析(F检验)比较各组样本均数间的总体变异，如果差别有显著意义，则用SNK检验对各组的样本均数进行两两比较并分析其差异。如需比较术后不同时段的指标差异则用独立样本t检验。以SPSS10.0软件行统计学分析，检验水准α＝0.05。
2 结果与分析
2.1 冷冻保存后移植物强度和细胞活性测定 各组的最大载荷无显著性差异(P＞0.05)，说明经两种深低温冷冻方法处理后，髌腱的最大载荷无明显降低。三组的细胞活性两两比较均有显著性差异(P＜0.05)，结合实际数据说明经两种冻存方法处理后
，细胞活性均有一定程度的下降，而程序冷冻液氮保存方法能更好的保存细胞活性(见表1)。表1 不同保存方法处理后的最大载荷和细胞活性测试结果
2.2 髌腱移植物术后淋巴细胞毒反应和移植物强度测定 三组的淋巴细胞死亡率在术后3周和术后8周均无显著性差异(P＞0.05)，而且两个异体移植组在术后8周较术后3周均有显著差异(t检验，P＜0.05)。可认为经两种冷冻方法处理后抗原性均明显降低，而且随移植时间的推移免疫原性会逐渐下降(见表2)。三组在术后3周的最大载荷无显著性差异(P＞0.05)，而在术后8周，SNK检验表明，程序冷冻液氮保存组和自体组无显著差异(P＞0.05)，而和－80℃保存组比较有显著差异(P＜0.05)，说明在术后8周，程序冷冻液氮保存组移植物的最大载荷优于－80℃深低温保存组而接 表2 移植术后各组淋巴细胞死亡率结果表3 移植术后各组的最大载荷测试结果
2.3 形态学观察
2.3.1 大体形态 新鲜肌腱表面光滑、色泽白亮、质韧、弹性好，－80℃深低温保存2周和程序冷冻液氮保存2周后的肌腱与新鲜肌腱无明显差异；三组在肌腱移植后3周和8周大体形态无明显差异，3周时韧带表面较粗糙、色白、略黄、质较软、光泽度及弹性较差，8周时韧带表面较光滑、色白、光泽度及弹性恢复，但比新鲜肌腱稍差。
2.3.2 光镜观察(图2～10)及透射电镜观察结果(见表4) 图2 正常兔髌腱(HE×40) 图3 －80℃深低温保存2周(HE×40) 图4 程序冷冻液氮保存2周(HE×40)
3 讨 论
3.1 同种异体腱的保存方法 目前深低温冷冻保存是保存同种异体腱最可行的方法［4］。常用的－80℃深低温冰箱保存不能理想地保存细胞活性，而且保存时间有限。普通的液氮保存方法不能做到严格的控制性降温而致腱组织损伤。实验中，我们提出了程序冷冻液氮保存的方法处理异体腱，做到了液氮保存时严格控制降温，最大限度地减少了超深低温冷冻对肌腱的损伤，而且可以充分发挥液氮保存的时限优势。
3.2 冻存对异体腱抗原性的影响 &n上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页
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