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同种异体腱移植重建膝关节交叉韧带的研究 |
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in this experiment.
Key words：allograft tendon；cruciate ligament；reconstruction
膝关节交叉韧带损伤公认的手术方法是韧带重建，但自体材料移植存在着取腱并发症和组织来源有限等问题，而人工韧带技术发展不成熟，生物工程韧带也只是处于研究阶段，在这种情况下，同种异体腱移植成为重建膝关节交叉韧带的另一种选择。目前深低温冷冻是保存同种异体腱最可行的方法［1］，最常用的是－80℃深低温冰箱保存，但其保存时间有限，且不能理想地保存细胞活性，而普通液氮保存方法又不能做到严格的控制性降温。因此，在实验中我们对移植物的冻存方法作了一定的改进，提出了程序冷冻液氮保存的方法处理异体肌腱，做到了液氮保存前严格控制性降温，最大限度地减少了超深低温冷冻对肌腱的损伤。
1 材料与方法
1.1 实验动物与分组 新西兰大白兔82只，体重2 000±100 g，随机分为A、B、C三组。A组12只大白兔取双侧膝关节1/2骨髌腱骨复合体共48条，将所取BPTB再随机平分为三组，即新鲜未冷冻组(A1组)、－80℃深低温保存2周组(A2组)和程序冷冻液氮保存2周组(A3组)，以比较冷冻对兔髌腱的影响；B组10只供异体腱；C组60只大白兔再随机平分为三组，即自体移植组(C1组)、－80℃深低温保存异体移植组(C2组)和程序冷冻液氮保存异体移植组(C3组)，以比较不同保存方法对移植物愈合过程的影响。
1.2 髌腱复合体的取材与保存 A、B两组动物取双侧膝关节髌骨髌腱胫骨结节复合体平分，以1/2骨髌腱骨复合体做为测试样本或移植物。程序冷冻液氮保存方法：将冻存管放入程序冷冻仪(CBS2100，USA)中，按设定好的冷冻程序先以1℃/min的速度降至4℃，平衡0.5 h，再以0.5℃/min的速度降至－80℃，然后以1℃/min的速度降至-180℃，最后置于液氮储存罐中保存2周备用。
1.3 手术方法 异体骨髌腱骨复合体移植前先于40℃生理盐水中融化15 min复温及庆大霉素盐水漂洗，然后植入替代异体移植组兔的右侧膝关节前交叉韧带，自体腱移植随机取左侧膝关节的内侧半或外侧半骨髌腱骨复合体植入右侧膝关节。
1.4 各项观察指标的测定方法
1.4.1 淋巴细胞毒反应 以供腱组兔脾脏提取淋巴细胞，调节浓度制成5×106/mL的淋巴细胞悬液备用［2］。将受体组兔取动脉血2 mL，凝固、离心提取上层血清。将受体血清100uL加入微试管内，再加入与之对应的供体兔淋巴细胞悬液100uL，轻轻摇匀，放入恒温培养箱内孵育37℃/45 min，待冷却后再加入补体(兔血清制备)500uL，室温(20℃)下培养1 h，然后加入台酚兰试剂2滴染色5 min，显微镜下淋巴细胞计数。淋巴细胞死亡率＝死亡淋巴细胞数/淋巴细胞总数×100％。
1.4.2 移植物强度测试 将BPTB复合体或重建后的移植物骨块穿钢丝并以骨水泥包埋制成拉伸试件，然后以自动材料试验机(Model1011 Instron Tester，USA)作匀速单轴加载试验(测试过程中保持试件的湿润)，先给予0.5N的微小预负荷，反复拉伸、松弛10次，然后以50 mm/min速度拉伸试件至完全断裂，取韧带自实质部断裂的试件记录最大载荷测定值。
1.4.3 细胞活性测定［3］ 将每个样本切成3段，用含0.2％胶原酶RPMI1640液分别消化切碎的每段肌腱上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] 下一页
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