子的两个肽段联接后免疫动物，比分别用单一肽段免疫所激发的抗 rPAc抗体明显升高。因此认为，将多肽偶联成束能显著增强其免疫原性。 smith等（1997）将 gTF酶活性片段 gGY和 aND以赖氨酸为核心分别构建有8条支链结构的多肽疫苗，经唾液腺周围免疫大鼠，结果显示，将抗原决定簇设计成这种结构具有高度的免疫原性，能诱导高水平的特异性唾液 igA抗体，并使动物龋齿发生率显著降低。 4．基因重组疫苗：利用遗传工程技术，将致龋菌毒力因子的结构基因克隆至载体质粒，构建基因重组防龋疫苗，也是很有应用潜力的免疫防龋手段之一。
选择安全无毒的载体细菌是基因重组防龋疫苗研究的一个关键环节。目前用于防龋疫苗研究的载体菌主要是减毒的沙门杆菌和乳链球菌。
减毒的沙门杆菌能在体内、体外稳定地表达高水平的克隆基因，且重组后仍保持其对肠相关淋巴组织（ gALT） peyer斑的粘附与定殖特性，可以激发较强的局部粘膜免疫反应。用载有茸毛链球菌 spaA基因的0.5kb三个重复片段与另一1.2kb的片段连接，插入质粒 pYA292并转化减毒的沙门杆菌，将获得的重组沙门杆菌免疫大鼠，测得实验组血清抗 spaAIgG和唾液抗 spaAIgA水平明显升高，并导致茸毛链球菌介导的鼠龋齿发生率明显下降。
乳链球菌长期用于生产酸奶和奶酪等乳制品，其安全性已广为接受。用乳链球菌作为载体构建的重组体，既具有克隆基因的免疫原性，又对机体安全无害。 iwaki等（1990）通过将变链菌 pac基因连接到穿梭质粒 pSa3上转化乳链球菌，构建携带 pac基因的重组乳链球菌，经小鼠灌胃免疫，可诱导小鼠唾液特异性抗 pScIgA及血清 igG抗体产生。我们（1997）将所构建的基因重组乳链球菌 hL107经不同途径免疫孕兔，观察到孕兔唾液和乳汁中特异性抗 pAc抗体的产生。对定菌大白鼠行灌胃免疫发现，重组乳链球菌能有效刺激大鼠发生特异性免疫应答，防止龋病发生，进一步证明了重组乳链球菌的免疫防龋效能。
另外，运用基因工程手段将变链菌的两毒力因子 pAc和 gTF连接构建融合蛋白，也是前景看好的候选防龋疫苗。 yu等（1997）将 pAc富含丙氨酸的唾液结合区（ pAcA）分别与 gTF-Ⅰ的葡聚糖结合区（ gB）和蔗糖结合区（ sB）融合，并在大肠杆菌表达。利用重组融合蛋白 pAcA-GB和 pAcA-SB免疫兔，研究发现，兔抗 pAcA-GBIgG能显著性抑制变链菌非水溶性葡聚糖合成，以及变链菌对唾液包被的 hA的蔗糖依赖性和非蔗糖依赖性粘附；而抗 pAcA-SB的抗体仅能抑制变链菌的非蔗糖依赖性粘附。他们推测 pAcA-GB融合蛋白在体内能明显抑制变链菌对牙面的粘附，具有广阔的应用前景。
5．核酸疫苗：近年来，一种新型的疫苗———核酸疫苗正成为世界瞩目的防止感染性疾病研究的热点。它是将编码某种蛋白质的外源性基因（ dNA或 rNA）直接导入动物细胞内，诱导宿主对目的基因所表达的蛋白质免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。它具有以下优点：①免疫原性强，表达的蛋白接近其天然构象；②可激发体液和细胞的免疫反应，免疫应答持久，且无毒力回升危险；③核酸疫苗具有共同的理化特性，为联合免疫提供可能；④疫苗制备简
便，省时省力。 现阶段，对艾滋病、 t细胞淋巴瘤等疾病的核酸疫苗研究已进入临床前阶段，乙型肝炎、丙型肝炎、结核病、甲型流感等核酸疫苗已在开发之中。在口腔疾病方面，国内已有学者着手 dNA防龋疫苗的研究。我们（1998）现已成功地用真核表达系统 pSVL与变链菌 pAc结构基因 pac的3.2kb片段构建了变链菌表面蛋白的 dNA疫苗 pSVL／ pac。并在运用计算机 dNA分析软件包对 pac基因进行严格的遗传学背景及分子克隆工程数据分析基础上，进一步设计和论证出构建防龋核酸疫苗的最佳克隆方案，同时选择并得到一种理想的高效真核表达载体系统。该真核表达质粒被认为是当今世界上研究核酸疫苗的最佳载体系统之一，其表达效率为90年代构建核酸疫苗的主要载体之一 pcDNA3的10～40倍，并能在哺乳动物体内持续稳定地表达。以上述工作为基础，一种含全部富丙氨酸区（ a-region）及富脯氨酸区（ p-region）的2．2kbpac基因片段的核酸疫苗即将被构建。利用这一疫苗，我们将全面开展核酸疫苗防龋的各项实验研究工作：包括克隆化 pac基因片段在哺乳动物细胞中的表达，在动物被免疫组织原位及体液中的检测，变链菌粘附的抑制实验及免疫定菌鼠后龋齿发生率变化的观测等一系列实验，这些工作将为人类运用核酸疫苗预防龋病奠定基础。
二、被动免疫防龋研究
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