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型出血热患者中性粒细胞与淋巴细胞功能变化研究 |
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tested in present research were not perfectly recovered. Conclusions The functional changes of lymphocyte in HFRS are closely related with the patients' different phases (febrile, oliguria, diuria and convalescence). It is probable the direct role of Hantaan virus-infection. Further more investigations are required to clarify the immune functions of polymorphonuclear neutrophil in HFRS because of its complicate responses. Attentions in clinic should be paid to the patients in convalescence phase.
【 Subject words 】 Hemorrhagic fever with renal syndrome Polymorphonuclear neutrophil Lymphocyte Hantaan virus
近年来对肾综合征出血热（HFRS）发病机理的研究报道很多。多方面实验结果都证实了HFRS病人的细胞免疫和体液免疫功能的紊乱，表现为细胞免疫功能低下，体液免疫功能亢进〔1〕。但目前尚未见有文献报道对HFRS病人同时进行淋巴细胞（Lym）和中性粒细胞（PMN）功能变化的检测、比较及它们与病程内在关系的研究。我们采用多种方法对32例由Hantaan病毒引起的姬鼠型HFRS病人外周血中性粒细胞和淋巴细胞的功能同时进行了动态观察研究，并探讨了HFRS病人的病程与中性粒细胞及淋巴细胞功能之间的关系。为治疗及研究HFRS提供了实验参考。
材料和方法
1.检查对象： 选自安徽省凤台县人民医院内科住院病人，经临床及血清学检查确诊为HFRS患者(1992年)，经流行病学调查及分析（包括血清学及PCR分型）属由Hantaan病毒引起的Ⅰ型出血热。正常对照为疫区健康献血员。
2.外周血Lym和PMN分离方法：肝素抗凝血(25U/ml) 加2倍量的无钙镁Hanks液，混匀后叠加于淋巴细胞分离液（上海试剂二厂）上2000r/min离心20分钟，收集单个核细胞层，无钙镁Hanks液洗2次，用含2%小牛血清的无钙镁Hanks液配成所需浓度的Lym悬液。同时沉淀细胞加等量3%右旋糖酐（上海长征制药厂，相对分子质量420×103）混匀后，置37℃，30分钟 后收集PMN层离心沉淀，Hanks液洗1次，加Tris-NH4Cl溶解残余红细胞，其余处理同Lym，配制成所需浓度的PMN悬液。
3.PHA皮肤试验：PHA（广州医药研究所生产）无菌生理盐水稀释成200μg/ml。取0.1ml 注射前臂皮内，24小时后测量红斑直径。
4.E花环试验：按全国统一操作流程并略加改进，具体步骤为： 1）Ea花环试验, Lym与绵羊红细胞（SRBC）比例1∶20，取Lym 悬液0.1ml加0.1ml SRBC悬液，混匀后立即1000r/min离心 5分钟 ，取出全部上清再返加2滴，轻轻摇匀后加入2滴0.8%戊二醛，置4℃冰箱固定15分钟，摊片、干燥、染色、油镜计数，算出Ea花环形成率； 2）Et花环试验，Lym与SRBC比例1∶60，等量Lym与SRBC悬液混匀，置37℃水浴中温浴10分钟后1000r/min 离心5分钟，置4℃冰箱过夜。以下步骤同上。
5.PMN吞噬试验：Pereira法和Wood法并加修改〔2，3〕。0.1ml白色念珠菌悬液（8×107/ml）加0.8ml PMN悬液（2.5×106/ml），加正常人血清0.1ml混匀，置37℃水浴1小时，1000r/min 离心5分钟，弃上清、沉淀细胞、摊片、油镜计数，算出PMN吞噬率。
6.PMN趋化试验：参照有关文献〔4〕，用3ml 1%琼脂糖（用Hanks液配制0.5%水解乳白蛋白）加热熔化至50℃时加0.3ml灭活小牛血清，混匀后铺于75.7mm×25.5mm载玻片上，冷却后打孔。每块板打上中下3行，每行6孔。上行加正常人混合血清10μl作趋化因子；中行加PMN悬液10μl(4×107/ml)；下上一页 [1] [2] [3] 下一页
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