沙眼衣原体实验诊断技术进展

　　目前国内外用于构建引物的衣原体DNA有7.5Kb质粒、MOMP基因（omp1）和16SrRNA基因。诊断试剂盒AMPLICOR Ct PCR已通过食品与药品管理局(FDA)的审批，其扩增靶序列即为质粒DNA。许多研究都已表明，PCR较培养法和EIA法都要敏感［7，9，11］，而且PCR对于有症状或无症状人群同样敏感［3］。但基于不同引物的PCR的敏感性仍有所不同。Roosendaal等［12］的研究表明，质粒引物PCR最敏感，omp1引物PCR最不敏感，16SrRNA基因引物PCR介于两者之间。这可解释为在每个衣原体细胞中DNA拷贝数不同的缘故。虽然omp1引物PCR敏感性较质粒PCR为差，但omp1引物PCR扩增的特异性好，而且Palmer等［13］报道通过巢式PCR，经过2轮扩增，同样能够达到质粒引物PCR的敏感性。并且omp1扩增后，利用限制性片段长度多态性（RFLP）还可对Ct进行基因分型［14］，这对流行病学调查具有重要意义。

　　PCR技术不但能检测尿道或宫颈拭子标本，而且可以采用尿标本进行检测。但尿中可能存在扩增的抑制物，从而影响PCR的敏感性。Verkooyen等［15］报道将标本进行预先的加热处理或使用2SP转运培养基可显著降低AMPLICOR Ct PCR对抑制因子的易感性。将临床标本加热处理后10倍稀释亦可在很大程度上防止这种抑制。除了尿中的抑制物会影响PCR的敏感性，导致出现假阴性结果外，PCR的另外一个缺点是由于其本身技术原理的原因，容易造成假阳性污染。

　　近年亦有学者应用LCR检测Ct。LCR属于一种探针扩增技术，是依赖靶核酸序列的寡核苷酸探针的连接技术。Abbott LCR-CT诊断试剂盒也已通过FDA的审批。同PCR相比，由于使用两对引物，用LCR检测Ct感染，具有更高的敏感性和特异性［16］。但连接酶价格昂贵，难以在临床普及应用，仅适用于科研，且国内应用较少。

　　最新发展的扩增试验是Gen-Probe公司的扩增Ct的转录介导扩增试验（TMA），扩增并检测Ct的rRNA。TMA的一个优点是每个感染细胞中有大量的rRNA。而且操作步骤简便，只是一个恒温过程，不需要变换温度的扩增仪。Crotchfelt等［17］报道TMA检测女性尿标本的敏感性和特异性分别为93.8%和100%，男性尿标本为95.6%和98.7%，提示TMA将成为另外一种能利用尿标本检测Ct的扩增方法。国内尚无采用该法进行检测的报道。

　　目前除了发展各种核酸扩增技术，国外学者们又将眼光投向了标本取材方面的改进上。除尿标本外，外阴标本也可能作为一种非侵入性标本而适用于PCR、LCR和TMA等高度敏感的扩增方法，在筛查高危人群中可能会替代侵入性标本［18］。测试外阴涂片标本可以节省用于尿标本离心的时间，而且可以由患者自行取材［19］。另外，为节省时间和费用，有学者尝试，同时进行几种性传播疾病病原体的共同扩增，但结果不尽如人意［20-22］。

　　综上所述，结合国内情况，泌尿生殖道Ct感染的实验诊断中，经典的细胞培养方法虽然特异，但耗时长、费用大，且不够敏感，不适于临床开展；免疫学方法简便快捷，在基层医院具有实用性；在具备分子生物学实验条件的医院，由于PCR方法高度敏感特异，可检测各发病率人群，只要严格规范操作，避免假阴性及假阳性结果的出现，可望在Ct感染诊断中常规使用。总之，Ct感染的诊断目前已发展到分子生物学水平，随着科学技术的不断进步，下个世纪有可能利用生物芯片等更新的技术进行检测。我们应密切注视检测技术的发展，以便准确、快速地对Ct感染作出诊断。

上一页  [1] [2]