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沈财成 陈红 陆永绥 陈小剑
摘要 用新底物2-氯-4-硝基苯-α-半乳糖-麦芽糖苷(Gal-G2-α-CNP)直接测定α-淀粉酶，不需要辅助酶，延滞时间短(＜15 s)，线性范围宽(可达2 200 U/L)，试剂稳定性好，不使用KSCN、NaN3等激活剂，不受内源性葡萄糖苷酶的干扰，与EPS法对比相关良好：Y＝1.27X＋0.50,r＝0.9990。
关键词 α-淀粉酶；连续监测法；2-氯-4-硝基苯-α-半乳糖-麦芽糖
2-choro-4-nitrophenyl-α-galactosylmaltoside as substrate for
determination of α-amylase
SHENG Caicheng,CHENG Hong,LU Yongshui,et al
(Department of Laboratory Medicine,Wenzhou Medical College,Wenzhou 325000)
Abstract Studied a method for direct measuring α-amylase activity with a new substrate of 2-choro-4-nitrophenyl-α-galactosylmaltoside.Without the need for auxiliary enzymes,the lag phase of this test was ＜15 s,the linear range up to 2 200 U/L and the reagent was stable.In this method,KSCN and NaN3 not used as activators and interference of endogenous α-Glucosidase was not found.Compare with EPS method(X)yield a regression of Y＝1.27 X＋0.50，r＝0.9990.
Key words α-amylase；continuous monitoring；2-choro-4-nitrophenyl-α-galaotosylmaltoside
α-淀粉酶(EC3.2.1.1)测定方法很多，尚难以标准化［1］。碘淀粉比色法，因底物和产物不确定，线性差而不能满足准确性要求［8］。最近IFCC批准了用亚乙基封闭的G7-pNP作底物的酶偶联法(EPS法)作为临时推荐方法，但该法需工具酶，延迟时间长，还不是最理想的参考方法［4］。使用2-氯-4-硝基苯-麦芽三糖(G3-CNP)作底物直接测定淀粉酶也有多篇文献报道［2，7］，该法延滞时间较短，CNP的摩尔消光系数不易受pH的影响，G3-CNP法更符合IFCC提出的理想Amy测定方法的条件，但因受内源性葡萄糖苷酶的干扰，而且使用NaN3或KSCN可能导致α-淀粉酶的异构，同时带来其它一些不利因素，被IFCC拒绝成为参考方法［3］。最近，日本Toyobo公司推出新底物2-氯-4-硝基苯-α-半乳糖-麦芽糖苷(Gal-G2-α-CNP)，与G3-CNP相比，在非还原性末端用半乳糖代替葡萄糖，从而避免了内源性葡萄糖苷酶的影响。我们对此作了方法学探讨，现报道如下。
1 原理
连续监测405 nm处ΔA/min来反映CNP的生成量，从而计算Amy的活力。
2 材料和方法
2.2.1 仪器 日立7060型自动生化分析仪。
2.2.1 试剂 Gal-G2-α-CNP(Toyobo)，α-葡萄糖苷酶(Toyobo)，Bis-Tris(Sigma)，其余试剂为国产，分析纯。对比方法：EPS试剂盒(宁波慈城生化试剂厂)。
2.2.2 应用试剂 50 mmol/L Bis-Tris/HCl缓冲液，pH 6.05。内含CaCl2 5 mmol/L，NaCl 41 mmol/L，Gal-G2-α-CNP 5.0 mmol/L。此试剂贮4℃避光保存至少稳定一个月。
2.3 测定方法 日立7060型分析仪参数：反[1] [2] 下一页
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