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P物质对大鼠下丘脑催产素及加压素免疫反应性神经元Fos癌蛋白的诱导作用 |
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段晓勤 鞠 躬 饶志仁
(第四军医大学神经科学研究所，西安 710032)
摘 要 为研究P物质激活的下丘脑大细胞神经分泌神经元及其分布，将P物质注入大鼠侧
脑室，用Fos癌蛋白免疫组织化学结合催产素或加压素抗血清免疫组织化学的双标记法，检测了
下丘脑各大细胞神经分泌核区被激活的催产素及加压素免疫反应性神经元。结果表明：Fos免疫
强反应性的神经元主要见于第三脑室周围区及室旁核，在视上核及其他下丘脑大细胞神经分泌
核区仅见到少数至极少数Fos免疫反应性神经元。Fos和催产素或加压素的免疫双染色神经元主
要见于第三脑周围区，由于第三脑室周的加压素样神经元较少，因此在该区域我们见到的主要
为中等至较多数量的Fos和催产素免疫双染色神经元，仅有少数的Fos和加压素免疫双染色神经元。室旁核的Fos免疫反应性神经元主要分布于室旁核的小细胞部，虽与催产素及加压素免疫反
应性神经元的分布区有部分重叠，但该核区却仅见到少数Fos和催产素或加压素的免疫双染色神
经元。此外，在视上核、背内侧副核也可见到少数Fos和催产素或加压素的免疫双染色神经元。
本研究中将P物质注射入侧脑室后诱导的Fos阳性表达的催产素及加压素样神经元在下丘脑的分
布与该区域P物质样传入纤维的分布不完全吻合，但与该区域P物质样受体的分布基本吻合。以
上研究结果提示，在下丘脑水平P物质对催产素及加压素样神经元功能的调节，可能主要通过调节部分第三脑室周催产素及加压素样神经元及少数视上核、室旁核及其他大细胞神经分泌核区
神经元的功能活动而实施的。
关键词 P物质 催产素 加压素 Fos癌蛋白 下丘脑室周区 免疫组织化学 大鼠
P物质已确定为哺乳动物中枢神经系统的重要递质，在神经系统的许多机能活动中起重要作用［1］。目前已有的研究表明，P物质免疫反应性物质存在于下丘脑多个核区的神经纤维及终末内［2~3］,而且P物质可影响下丘脑大细胞神经分泌系统催产素及加压素样神经元的分泌活动［4~6］。然而，催产素及加压素样神经元存在于下丘脑的多个神经分泌核区，P物质究竟通过影响哪些神经分泌核区的神经元而实施对催产素及加压素神经元分泌活动的调控，不同的研究说法不一(参看综述)［7］，而且缺乏形态与功能相结合的研究证据。本实验用对神经元功能活动进行细胞定位的Fos技术［8,9］，研究了P物质激活的下丘脑大细胞神经分泌神经元及其分布。Fos技术是利用神经元受到某种兴奋性刺激时其c-fos癌基因的表达急剧增加，合成的Fos癌蛋白堆积于胞核中的特点。用原位杂交法或抗体免疫组织化学法在脑切片上染出受兴奋的神经元［8,9］。本实验采用免疫组织化学方法，并进一步用Fos和催产素或加压素免疫组织化学双染色方法研究了此双重免疫标记的分布，我们对P物质对催产素及加压素样神经元活动调节的可能性进行了探讨。
材料和方法
实验用成年雄性SD大鼠8只，体重180～200g。1%戊巴比妥钠辅以846(第四军医大学出品)麻醉，在无任何疼痛反应条件下进行侧脑室注射，用微玻管(尖端直径5～10μm)，于Bregma点向后约1.0mm，向右约1.5mm,将5～10g/5L P物质(Sigma)注入侧脑室，该液以无菌生理盐水配制。4～5h后，将动物再次深麻醉，并经左心室依次灌入生理盐水50ml,4%多聚甲醛700～800ml(4℃下，1.5h),及20%蔗糖液100ml,立即取脑，将鼠脑浸入蔗糖液中，4℃下24h。下丘脑连续冠状冰冻切片，厚50μm，将切片收集于0.01mol/L的磷酸盐缓冲液中，随后用ABC法进行如下免疫组织化学染色：(1)Fos抗体免疫组织化学法，将切片入兔抗Fos血清(1∶1 000，Oncogene Sci),孵育了3d(4℃)，随后依次进入生物素化羊抗兔IgG(B-IgG,1∶400,Sigma)和ABC(1∶400,Sigma)各孵育3～4h(室温)。继之用葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵法呈色［10］，结果免疫产物显为黑色。将其中1/3切片贴片，作为Fos单染色结果进行观察。
(2)将另2/3切片继续进行Fos/催产素或Fos/加压素免疫双染色，方法如下：将用Fos抗体染色后的切片入兔抗催产素血清(1∶3 000,WatPa)或兔抗加压素血清(1∶3 000,WatPa)孵育了3d(4℃)，随后依次进入羊抗兔B-IgG(1∶400,Sigma)和ABC(1∶400,Sigm[1] [2] 下一页
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