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运用AFLP技术筛选分离野败型水稻mtDNA中与雄性不育性状相关的片段 |
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凌杏元 周培疆 关和新 景润春 朱英国
摘要 对野败型水稻不育系(珍汕97A)、保持系(珍汕97B)和F1杂种(汕优63)线粒体DNA进行了AFLP比较，从M/PA引物对选择扩增产物中找到了不育系与保持系差异条带ZA1、ZA2和ZA3。Northern分析表明，片段ZA1黄化苗期无转录产物, 可能是非编码序列；而ZA2、ZA3两片段在不育系、保持系和F1杂种中的转录则有差异，其中片段ZA2在黄化苗期保持系转录，不育系和F1杂种无转录产物；片段ZA3在黄化苗期保持系和F1杂种转录，表明ZA3转录受核恢复基因Rf影响。
关键词 野败型水稻，线粒体DNA(mtDNA)，扩增片段长度多态性(AFLP),细胞质雄性不育(CMS)
中图分类号 Q74
Isolation of the mtDNA Bands Associated with CMS by AFLP Technique
LING Xing-Yuan1, 2) ZHOU Pei-Jiang1) GUAN He-Xin1)
JING Run-Chun1) ZHU Ying-Guo1)
(1.College of Life Science,Wuhan University,Wuhan430072)
(2.Center of Biotechnology,Anhui Agriculture University,Hefei230036)
Abstract Mitochondrial DNA extracted from Zhenshan 97A、Zhenshan 97B and Shanyou 63(F1) were analysed and compared each other with AFLP technique. Three polymorphismic DNA fragments, ZA1、ZA2and ZA3were found when the mtDNA fragements were amplified with selective primer M/PA. The results of northern analysis show that ZA1 may be the sequence without information, but ZA2、ZA3are the coding sequence. ZA2transcripts only in maintain line, no transcription product was detected in Zhenshan 97A and Shanyou63. ZA3transcripts both in Zhenshan 97B and Shanyou 63(F1), the result indicates that the transcription of ZA3was effected by the nuclear geneRf.
Key words WA rice,mtDNA,Amplified fragment length polymorphism(AFLP), Cytoplasmic male sterility(CMS)
杂交稻主要类型BT型和野败型雄性不育机理的研究较多，特别是BT型水稻，其不育机理的研究已从最初的生理生化、结构和遗传深入到线粒体基因及其转录和表达产物上〔1～3〕。野败型雄性不育机理的研究主要集中在国内，杨金水等比较了不育系与保持系mtDNA酶谱差异〔4〕，刘炎生等用RFLP技术对CoxⅠ和CoxⅡ两个位点进行了比较〔5〕，许仁林等还用RAPD技术分离到野败型水稻不育系特有的扩增片段〔6〕。相对BT型而言，野败型不育机理的研究较为落后，有必要进行更深入的研究。
AFLP技术是一种新的分子标记技术〔7〕，同RFLP和RAPD 等技术一样近年来运用较多。它具有以下的优点：(1) 所需DNA量少(仅需0.5μg), 对线粒体DNA而言，这很重要，因为要得到RFLP研究所需的几十到上百微克mtDNA是很困难的；(2) 效率高且简单, RFLP每次只能分析已知少数几个位点，且操作麻烦, 而AFLP一次选择扩增就能比较几十甚至上百条带，也即几十至上百个位点；(3) 分辩率高, AFLP由于扩增片段短，片段多态性检出率较高, 而RFLP由于片段相对较大，内部多态性往往被掩盖; (4) 可靠性好, AFLP由于是特定引物扩增,[1] [2] 下一页
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