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雷公藤甲素对异种神经移植后神经再生的影响

使去神经支配的骨骼肌运动终板再形成[5]。未经处理的异种神经移植后使用免疫抑制剂,宿主的再生神经纤维能长入移植神经[6~9]。但目前常用的免疫抑制剂Cyclosporin A,价格昂贵、副作用多。而中药雷公藤制剂价格低廉、又能延长同种异体心和肾的存活期[10,11]。本研究探讨雷公藤甲素对异种移植神经的影响、观察神经再生及其对骨骼肌和皮肤靶器官的再支配。



材料和方法

  5只1.5~2.0kg的日本成年大耳兔为神经供体,麻醉后取出兔的胫神经。成年Wistar大鼠(280~300g)29只为移植神经的受体,戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉大鼠,于梨状肌下缘10mm处切除右坐骨神经8mm,移植入10mm长的兔胫神经,在额式放大镜下用9/0无损伤线将大鼠坐骨神经的近、远断端与植入的兔神经缝合,植入的兔神经与大鼠的坐骨神经等粗。实验组20只大鼠于术前1d和术后2周口服溶解于自来水中的雷公藤甲素6.6μg/kg.d,术后3周改为3.3μg/kg.d,术后4周为3.3μg/kg.隔日,术后5周为1.7μg/kg.隔日,术后6周停服雷公藤甲素。对照组9只大鼠术后口服自来水。
  异种神经移植术后,实验组的大鼠分别存活4、8、12、16、24周,各存活期分别为4只动物。对照组的大鼠分别存活4、8、16周,各存活期分别为3只动物。麻醉后取出移植神经中段、距远端吻合部10mm处的远段坐骨神经,用含2.5%戊二醛的0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.2)4℃固定2h,再入含1%锇酸的0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.2)4℃后固定1h,Epon618包埋,半薄切片经甲苯胺蓝染色,超薄切片常规染色。近段坐骨神经及其相连的移植神经、移植神经及其相连的远段坐骨神经入10%福尔马林固定,石蜡包埋纵切片,Bielschowsky法镀银染色。
  大鼠手术侧腓肠肌入含0.8%戊二醛的0.06mol/L磷酸缓冲液(pH7.2)4℃固定1h,冰冻切片,按Karnovsky-Roots法显示乙酰胆碱酯酶(AChE),切片的组织化学反应分为4个组,A组:Karnovsky-Roots孵育液;B组:孵育液中加四异丙基焦磷酰胺(iso-OMPA);C组:孵育液中加毒扁豆碱;D组:孵育液中不加乙酰硫代胆碱。一部分切片AChE结合镀银法染色。手术侧的爪部皮肤经10%福尔马林固定,冰冻切片,按Gross-Schultze改良的Bielschowsky法镀银染色显示皮肤的感觉神经末梢。

结果

1.服用雷公藤甲素的异种神经移植后的神经再生
  异种神经移植术后除4周的移植神经稍粗外,其他各存活期的移植神经与宿主的坐骨神经等粗,移植神经的长度仍为10mm。移植神经与周围组织疏松相连、分离容易。
  在光镜下,神经移植后不同存活期均可见再生神经纤维从宿主坐骨神经的近段越过近端吻合部长入移植神经,继而穿过远端吻合部长入远段坐骨神经(图1,2)。但术后4周长入远段坐骨神经的再生神经纤维较存活期长的少。经甲苯胺蓝染色的移植神经和远段坐骨神经的半薄横切片上,再生神经纤维成束聚集或散在分布(图3,4)。术后4周尚可见少量溃变纤维,远段坐骨神经内的再生神经纤维较移植神经段稀疏。
  移植神经中段和远段坐骨神经的横切片,在电镜下观察,可见大量再生轴突被Schwann细胞包绕形成有髓纤维,部分再生轴突被同一个Schwann细胞包绕形成无髓纤维,无髓纤维散在于有髓纤维之间。神经束膜包绕再生的有髓和无髓纤维形成神经束(图5)。Schwann细胞之间存在胶原原纤维。随着存活期的延长,再生轴突的直径增粗,有髓纤维的髓鞘增厚,超微结构日趋成熟。异种神经移植术后4周的移植神经段和远段坐骨神经仍存在少量溃变神经纤维及吞噬了细胞碎片和溃变髓鞘的巨噬细胞,移植神经段出现极少量淋巴细胞。其他各存活期的移植神经段和远段坐骨神经未见淋巴细胞和浆细胞。

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